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Notch基因首先在果蝇体内发现，由于该基因的缺失会导致果蝇翅膀边缘出现缺口(notch)而得名。Notch信号传导通路广泛存在于脊椎与非脊椎动物体内，它是决定细胞命运的重要路径之一。Notch受体是由胞外区(extracellularNotch，ECN)和跨膜区/胞内区(Notch transmembrane,NTM)两个亚基组成的异二聚体，二者是通过共价键结合在一起的，并具有Ca2+依赖性。哺乳动物中有多重Notch配体，与Delta高度相似的配体称为Delta或Delta样(Delta-like，Dll)，与Serrate相似的称为Serrate或Jagged。目前发现人的notch配体共有5种，即Delta-like-1，Delta-like-3，Delta-like-4，Jagged1，Jagged2。作为人重要Notch配体之一的Delta样配体1是由723个氨基酸组成的单次跨膜蛋白，其中胞外区含有539个氨基酸，由1个N端保守的DSL(Delta/Serrate/Lag2)基序和8个表皮生长因子样重复序列(epidermal growth factor-like repeats，EGF-R)结构域组成，具有重要的生物学活性。该DSL结构域结合Notch受体，促进受体异二聚体分离，进而受体活化激活下游信号，Notch受体经过三次剪切，最终胞内区释放到细胞核，激活发状分裂相关增强子(hairy and enhancer of split，Hes)等靶基因的转录，进而调节细胞分化和组织发生。胞内域功能还不太清楚，有研究表明Delta1的胞内区能够诱导细胞的生长抑制。 近几年研究表明Notch信号传导通路与肿瘤发生有关，如Purow B W等人在2005年发现Notch1及Notch4配体Delta-like-1、Jagged1在多种神经胶质细胞瘤中过度表达，并且在联合其他细胞因子的情况下，hDll1胞外区可以抑制造血干细胞的分化并促进其增殖。鲁茁壮等克隆表达了人Notch配体Delta-like-1（hDll1）的胞外区，并经过集落培养检测证实其对原始的造血祖细胞具有扩增作用。 终上所述，根据已知序列，将合成hDll1ext基因片段经PCR扩增，NheⅠ和BamHⅠ双酶切后连接至pIRES2-EGFP-Fc中，取连接产物转化感受态细胞，涂于含有kana+抗性的LB固体筛选培养基上，倒置过夜，次日挑选阳性克隆，经菌落PCR验证正确后测序，将正确的重组质粒转染至CHO-S细胞，经G418筛选高表达细胞系，利用rProteinA亲和柱纯化目的蛋白，并通过检测Notch下游信号分子Hes1的表达及双荧光素酶报告基因实验检测蛋白活性。 结果筛选得到了高效表达hDll1ext-Fc的CHO-S细胞株10C7，经WAVE培养密度最高达到6.27×106cells/mL，培养近2周后，细胞大量死亡收得上清体积约1.1L，测定上清中目的蛋白浓度为47.8μg/mL，估计得到总目的蛋白为52.58 mg。将上述上清经rProtein A亲和柱纯化获得较高纯度的融合蛋白，BCA试剂盒测得蛋白浓度为1.5mg/mL，体积为30mL，最终得到的目的蛋白总量为45mg，可以得到rProtein A亲和柱回收率为45mg/52.58mg=85.6％。配合生物活性检测实验显示，可溶性的hDll1ext-Fc能够激活Hes1报告基因，并且能上调Notch下游分子Hes1的表达，证实其可以激活Notch通路。 本实验通过纯化获得的较高纯度的具有生物学活性的hDll1ext-Fc融合蛋白，为后续研究它的功能奠定了重要基础。