【摘 要】
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研究目的:阐明在胰腺癌细胞中,miR-1291可能作用的分子通路及其对细胞凋亡的影响,研究miR-1291在胰腺癌发生发展机制,以便为临床胰腺癌的早期诊断及基因靶向治疗提供新的方向。研究方法:本研究通过q RT-PCR验证miR-1291在胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）及胰腺癌细胞（PANC-1）内表达情况;通过使用lipo 3000体外转染将miR-1291模拟物（miR-1291 mim
【基金项目】
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山西省自然科学基金“RNA结合蛋白PUM2调控miR-221和miR-1291促进胰腺癌化疗耐药机制研究（编号:201801D121217）”；
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研究目的:阐明在胰腺癌细胞中,miR-1291可能作用的分子通路及其对细胞凋亡的影响,研究miR-1291在胰腺癌发生发展机制,以便为临床胰腺癌的早期诊断及基因靶向治疗提供新的方向。研究方法:本研究通过q RT-PCR验证miR-1291在胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）及胰腺癌细胞（PANC-1）内表达情况;通过使用lipo 3000体外转染将miR-1291模拟物（miR-1291 mimics）、miR-1291抑制物（miR-1291 Inhibitor）及实验对照组（miR-1291 mimics NC、miR-1291 inhibitor NC）转入胰腺癌细胞株,并设置空白对照组（不加转染基因,其余与实验组一致）。q RT-PCR验证各组细胞转染效率;采用生物信息学分析技术,预测miR-1291靶基因及其表达蛋白,通过提取转染miR-1291模拟物、miR-1291抑制物及对照组后细胞总蛋白,Western blot检测相关靶蛋白表达水平;通过流式细胞仪检测转染miR-1291模拟物、miR-1291抑制物及对照组后对胰腺癌细胞凋亡的影响。研究结果:（1）q RT-PCR结果显示:与胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）相比,胰腺癌细胞（PANC-1）miR-1291表达水平较低;与空白组相比,转染miR-1291模拟物组（miR-1291 mimics）胰腺癌细胞内miR-1291表达水平明显升高;转染miR-1291抑制物组（miR-1291 Inhibitor）胰腺癌细胞内miR-1291表达水平明显降低;实验对照组（miR-1291 mimics NC、miR-1291 inhibitor NC）胰腺癌细胞内miR-1291表达水平则未见明显差异。（2）采用生物信息学分析技术,预测miR-1291可能靶向作用于ROCK-1、MUC1等基因从而发挥其在胰腺癌中的抑癌作用。为了进一步明确miRNA-1291在胰腺癌细胞株（PANC-1）对预测蛋白的调控情况,蛋白质印记分别检测转染miR-1291模拟物组（miR-1291 mimics）、miR-1291抑制物组（miR-1291 Inhibitor）及对照组（m iR-1291 mimics NC、miR-1291 inhibitor NC）后ROCK-1、MUC1表达情况,结果显示:转染miR-1291 mimics NC与miR-1291 inhibitor NC后,ROCK1及MUC1蛋白表达水平未见明显差异,而转染miR-1291 mimics组可显著降低ROCK-1及MUC1蛋白表达;相反转染miR-1291 inhibitor组可显著上调ROCK-1及MUC1蛋白表达。（3）流式细胞仪检测细胞凋亡:与空白对照组相比,转染miR-1291模拟物组（miR-1291 mimics）可显著促进胰腺癌细胞凋亡（早期凋亡+晚期凋亡）,而miR-1291抑制物（miR-1291 Inhibitor）可抑制胰腺癌细胞凋亡（早期凋亡+晚期凋亡）。研究结论:1.miR-1291在胰腺导管上皮细胞及胰腺癌细胞内存在差异表达,且在胰腺导管上皮细胞内表达水平远高于在胰腺癌细胞;2.通过上调或下调miR-1291在胰腺癌细胞内的表达水平,从而影响ROCK-1、MUC1的表达水平,间接从蛋白水平验证ROCK-1及MUC1为miR-1291下游靶基因调控产物,即在胰腺癌细胞内,通过miR-1291/ROCK-1及miR-1291/MUC1途径影响胰腺癌生物学功能;3.通过上调miR-1291在胰腺癌细胞内的表达可显著促进胰腺癌细胞凋亡,而下调miR-1291在胰腺癌细胞内的表达可显著抑制胰腺癌细胞凋亡。
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