轮状病毒(Rotavirus，RV)属于呼肠孤病毒科，轮状病毒属；已被确认为引起全世界婴幼儿急性胃肠炎最常见的病原。轮状病毒感染每年导致全球约1.25亿婴幼儿发生腹泻，轮状病毒腹泻每年造成全球90万5岁以下婴幼儿死亡，严重影响了婴幼儿的健康并给全球带来巨大的疾病负担。轮状病毒引起的腹泻至今尚无特效药物进行治疗，疫苗是目前证实唯一最有效的预防方法。本论文研究内容包括A组轮状病毒(GARV)武汉地区G9型流行毒株CC-1的分离及vp7基因的克隆与分析；A组轮状病毒vp7基因转录载体的构建与检测；A组轮状病毒重配株的构建。具体内容如下： 第一章全面概述了轮状病毒的形态结构、理化性质、基因组结构及编码的蛋白质、体外培养、以及A组轮状病毒的流行病学、轮状病毒疫苗研究现状，重点论述了G9型轮状病毒的流行特征及轮状病毒的反向遗传学研究。 第二章武汉地区G9型轮状病毒的分离和vp7基因的克隆与序列分析采用MA104细胞从粪便样本中分离CC-1株，RT-PCR获得vp7基因，并克隆至pGEMT-easy载体，获得质粒pGEMvp7-G9。对质粒插入片断测序并进行序列分析。 第三章A组轮状病毒全长vp7基因转录载体的构建与检测。采用Overlap PCR．方法构建5端上游有T7-RNA聚合酶启动子、下游有HDV核酶序列与T7-RNA聚合酶终止子的vp7基因，构建vp7转录载体pGEMvp7-Rz。该质粒转染预先感染vTF7-3的哺乳动物细胞后，在哺乳动物细胞中获得具有正确的正确5与3末端的vp7+sRNA。 第四章反向遗传学方法构建A组轮状病毒重配株。采用补骨质素一紫外线A使重组痘病毒vTF7-3失去感染性，但仍保持表达T7-RNA聚合酶的活性。将重组痘病毒vTF7-3感染Vero细胞，采用G1型A组轮状病毒vp7的全长eNDA转录载体转染感染了vTF7-3的Vero细胞，在细胞内获得具有正确5与3端的轮状病毒vp7基因+sRNA。然后将另一株GlO型A组轮状病毒感染轮状病毒敏感的vp7细胞，在病毒的包装过程中vp7发生重配。然后使用单克隆抗体对重配病毒进行筛选。