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目的: 通过细胞学实验,观察晚期糖基化终末产物(advanced glycationend products,AGEs)对人软骨细胞TNF-α、MMP-13、IL-1表达以及NF-κB活性水平的影响,以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ)特异性激动剂匹格列酮对上述反应的抑制作用,为匹格列酮这一2型糖尿病治疗药物用于骨关节炎(osteoarthritis,OA)治疗提供实验与理论依据。 方法: 运用机械分离与两步酶顺序消化法分离培养人软骨细胞,并用Ⅱ型胶原免疫组织化学染色以及细胞免疫荧光对人软骨细胞进行鉴定。在体外分离培养的人软骨上: (1)不同浓度AGEs(1-100μg/ml)干预人软骨细胞24h后采用Real-time PCR及Western blot检测TNF-α、MMP-13、IL-1三者的mRNA及蛋白表达水平,采用Westernblot检测人软骨细胞胞浆中IKBα及胞核中NF-κB p65的含量; (2)不同浓度(1-100μg/ml)AGEs及不同处理时间(3、6、12、24h)干预人软骨细胞后,检测PPARγ的表达水平; (3)预先加入不同浓度匹格列酮(1-50μM)与软骨共同孵育2h,再加入100μg AGEs处理24h,检测PPARγ、TNF-α、MMP-13与IL-1β的mRNA及蛋白表达水平,同时应用Western blot检测人软骨细胞胞浆中IKBα及胞核中NF-κB p65的含量。 结果: (1)通过机械分离与两步酶顺序消化法获得了数量多、纯度高的人软骨细胞; (2)与对照组比较,AGEs可浓度依赖性地诱导人关节软骨细胞TNF-α、MMP-13、IL-1α、IL-1β表达增多,且以100μg/ml组作用最明显; (3)与对照组比较,AGEs处理组中软骨细胞胞浆中IKBα含量明显减少、而胞核中NF-κB p65的含量明显增多,且其作用随着AGEs浓度增高而增加,以100μg/ml组作用最显著; (4)AGEs干预组中软骨细胞PPARγ表达水平明显低于正常对照和BSA对照组比较,且随着AGEs浓度增加以及作用时间延长,软骨细胞PPARγ表达水平越低;(5)预先加入匹格列酮后再加入AGEs处理软骨细胞发现,软骨细胞中TNF-α、IL-1、MMP-13水平显著低于单独AGEs处理组; (5)匹格列酮+100μg/ml AGEs处理组中,软骨细胞核NF-κBp65含量明显高于单独AGEs处理组,而胞浆中IKBα含量显著低于单独AGEs处理组。 结论: (1)AGEs可促进NF-κB活化,诱导IL-1、MMP-13和TNF-α表达增多; (2)AGEs能诱导人软骨细胞PPARγ下调; (3)PPARγ特异性激动剂匹格列酮能够通过降低NF-κB活化水平,对AGEs诱导人软骨细胞IL-1、MMP-13和TNF-α表达增多的反应起到抑制作用。