【摘 要】
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根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)已被广泛用于双子叶植物遗传转化,但是却比较难以转化单子叶植物特别是具有重要经济值的小麦、玉米和水稻等.农杆菌介导拟南芥转化的
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根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)已被广泛用于双子叶植物遗传转化,但是却比较难以转化单子叶植物特别是具有重要经济值的小麦、玉米和水稻等.农杆菌介导拟南芥转化的花器浸蘸法(floral dip)是当前不需要组织培养或植株再生的最简单的转化方法.我们将该方法应用于小麦的转化,通过GUS报告基因系统详细的探讨了影响GUS瞬时表达频率的因素,并有分子证据表明外源基因已经整合进小麦的基因组中,初步建立了通过花器浸蘸法利用农杆菌转化小麦的体系.在该研究中,农杆菌菌株LBA4404(pTOK233)有徕对处于花期的小麦穗部进行浸蘸处理,其含有一超双元载体pTOK233,在其T-DNA区携带有gus报告基因和潮霉素磷酸转移酶基因(hpt),我们在不同处理条件下对小麦花器的GUS瞬时表达频率进行了研究,并根据GUS的瞬时表达频率确立了适宜的接种条件.结果表明,适宜的接种时期应在小麦开花前2天至刚见花;接种菌液的OD600值应0.75至0.9之间;接种菌液的PH值应在5.8左右;浸蘸时间以5分钟为宜;保湿时间以24小时较为合适.在供试的七个品种中均检测到了较高的GUS瞬时表达频率.该研究证明了利用农杆菌通过花器浸蘸法能够转化小麦.
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