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为了实现对氯霉素残留的免疫分析，本实验室建立了检测动物性食品中氯霉素残留的ELISA快速检测试剂盒。由于各国对氯霉素在动物性食品中的最高残留限量（MRL）的规定越来越低，对氯霉素检测试剂盒的灵敏度要求也随之提高，由此，本实验对该试剂盒中的主要试剂和反应条件进行了进一步改进，研究结果如下。1．氯霉素全抗原及酶标记抗原的合成用化学方法合成了氯霉素半抗原的中间体，然后采用重氮化法将此中间体与人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶连制备了氯霉素全抗原；采用过碘酸钠法合成了酶标记抗原。氯霉素全抗原和酶标记抗原经紫外分光光度计鉴定其合成是成功的。2．氯霉素多克隆抗体的制备购进20只日本大耳白兔，随机分为7组，前6组免疫不同的氯霉素全抗原，第7组为空白对照，经四次免疫后颈动脉放血制备了抗血清。对抗血清进行了饱和硫酸铵粗提、葡聚糖G（200）纯化，CAP—HSA组多克隆抗体效价和灵敏度最高，效价可达5×105，灵敏度用IC50表示可达4.5μg／L。3．氯霉素单克隆抗体的制备用氯霉素全抗原免疫Balb／c小鼠，通过常规的细胞融合技术与SP2／0骨髓瘤细胞融合；用间接ELISA和直接竞争ELISA进行双筛选，所得的阳性杂交瘤细胞株，采用有限稀释法进行了克隆，得到了4株单抗细胞株。在细胞株筛选的过程中发展了一种梯度筛选的方法，使筛选出的细胞株能够分泌高亲和力的抗体。4．氯霉素ELISA检测方法的考核ELISA方法的灵敏度：用IC50表示，变动范围在7.9μg／L～15.6μg／L之间，均值为11.6μg／L；方法的最低检测限：对标准溶液的最低检测限为0.3ng／mL，对猪肌肉、鸡肌肉中氯霉素的最低检测限分别为2.540μg／kg、1.896μg／kg；方法的准确度：当添加浓度为3.0μg／kg～10.0μg／kg时，氯霉素在猪肉中的回收率均在60％～110％之间，批间变异系数均低于20％；方法的精密度：此方法批内和批间变异系数均低于30ng／mL，符合残留检测要求；ELISA检测方法与GC方法的比较：ELISA法回收率为71.2％，低于GC法的87.6％，变异系数为6.7％，高于GC法的6.6％，但均属正常波动范围。5．氯霉素ELISA检测试剂盒的研制试剂盒的稳定性：2℃～8℃稳定性试验及37℃加速稳定性试验证明试剂盒在4℃可保存6个月；从ELISA方法的灵敏度、准确度、精密度等方面对自制试剂盒和荷兰产的试剂盒进行了比较，结果自制试剂盒在灵敏度、准确度、精密度等方面均低于荷兰产的试剂盒；动物残留实验表明自制的试剂盒基本具有实样检测能力；对试剂盒的复核及应用结果表明：自制试剂盒具有样品前处理简单、灵敏度高、准确可靠、操作快速简便等的优点，可广泛用于相关产品中氯霉素残留的检测。