[目的]胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,目前综合治疗效果不佳,免疫逃逸可能在其恶性进展中发挥了重要作用。调节性T细胞(Treg)可以诱导机体的免疫抑制,在胶质瘤组织中也有浸润,已有研究试图探究Treg对GBM病人的预后作用,但是结论不一,此外,Treg在胶质瘤中的分化机制亦罕有报道。本课题希望首先明确Treg在GBM中的聚集情况,然后深入分析这类免疫抑制细胞对临床转归的预后价值,最后揭示naive CD4+T细胞向Treg分化的可能机制。[方法]在第一部分中,首先采用Western Blot检测了不同级别胶质瘤组织、脑外伤组织中Foxp3蛋白的含量,然后对62例GBM石蜡切片进行了Foxp3、CD8、 p53、MGMT、Ki-67免疫组化染色,镜下计数各指标的表达情况,并对Foxp3和CD8实施了线性相关分析,根据临床病理资料对病人分组,比较不同组间Foxp3CD8等指标的差异。在第二部分中,以Foxp3的中位表达密度为分界点将上述62例病人等分为两组,结合预后资料,针对无进展生存期(PFS)和总生存期(0S)进行了Kaplan-Meier生存分析,采用同样的方法对CD8、Foxp3+/CD8+的预后作用进行了分析,此外,还根据p53、MGMT、Ki-67等病理指标对病人分组,进一步研究了Foxp3、 CD8、Foxp3+/CD8+在各个亚组内的预后价值,最后,纳入所有临床、病理、免疫指标,进行了单因素和多因素分析。在第三部分中,首先,收集了不同级别胶质瘤病人的外周血、脑脊液、肿瘤组织匀浆液,采用FlowCytomix及ELISA的方法检测其中IL-6、IL-10的含量并做比较,再以不同浓度的IL-6、IL-10分别孵育从健康人外周血提取的naiveCD4+T细胞72小时,用流式细胞术检测CD4+细胞中CD25+Foxp3+田胞的比例；其次,从新鲜胶质母细胞瘤标本中分选得到胶质瘤干细胞(GSC)及CD133-细胞,再分别用GSC及上清、CD133-细胞及上清孵育naive CD4+T细胞,检测Treg的比例；最后,通过慢病毒转染健康人巨噬细胞而获得B7-H4阳性巨噬细胞,再分别用这类细胞及未转染B7-H4的对照细胞孵育naive CD4+T细胞,同上检测Treg的比例。[结果]胶质瘤级别越高,肿瘤组织中Foxp3蛋白含量越高,而正常脑组织中几乎无Foxp3表达。Foxp3主要位于细胞核,Foxp3+淋巴细胞在肿瘤标本中呈散在分布,平均密度为8.6个/mm2,CD8+淋巴细胞平均密度为49.6个/mm2,显著高于前者(P<0.001),而且这两者之间呈正相关(rs=0.375、P=0.003)。此外,Foxp3表达密度和临床病理特征无关。Foxp3高表达组的中位PFS为9个月,显著低于Foxp3低表达组的中位PFS12个月(P=0.001),两组的中位0S分别为16个月和20个月,Foxp3高表达组也显著短于Foxp3低表达组(P=0.003)。CD8高、低表达的两组间的PFS和OS均无显著性差异。高Foxp3+/CD8+组的中位PFS为9个月,而低Foxp3+/CD8+组为12个月,两者间的差异有统计学意义(P=0.031),两者间的OS的差异尚不够显著。不同病理分型下Foxp3的预后意义也不同,比如,在Ki-67低表达组,Foxp3能够提示不良预后,而在高表达组,却无阳性发现。针对PFS和OS的多因素分析均显示,Foxp3是GBM病人的一个独立预后因素。IL-6在不同级别胶质瘤病人的体液中无明显差异,但在高级别胶质瘤的组织匀浆液中却显著富集,1 ng/ml IL-6处理后的CD4+细胞中Treg的比例就显著高于未经处理的细胞(P <0.05),5 ng/ml IL-6处理后的细胞中Treg的比例显著高于1ng/ml IL-6处理后的细胞(P<0.01),而5 ng/ml和10 ng/ml IL-6处理的两组间无显著差异。IL-10在不同级别胶质瘤病人的体液中无明显差异,在高级别胶质瘤的组织匀浆液中呈增多趋势,但无统计学意义,用不同浓度IL-10处理的naive CD4+T细胞中Treg比例无明显差异。GSC及其上清处理组的Treg比例显著高于其余各组,而这两组之间无显著性差异,CD133-肿瘤细胞及其上清处理组与对照组间均无显著性差异。经LV-B7-H4转染的巨噬细胞处理的CD4+T细胞中,Treg比例显著高于由正常培养基、正常巨噬细胞或LV-GFP转染的巨噬细胞处理的其他各组。[结论]Treg在胶质瘤中的浸润程度随肿瘤级别升高而上调,GBM肿瘤组织中Treg和CD8+细胞的数目呈正相关。Treg是GBM病人的一个独立预后因素,肿瘤微环境中Treg越多,病人生存期越短。IL-6、GSC、B7-H4阳性巨噬细胞均可以促进naive CD4+T细胞向Treg的分化。