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炎症失控是感染性疾病并发多器官功能障碍的主要发病机制，单核-巨噬细胞的活化在诱导炎症反应中起关键作用。在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)或其它致炎因素作用下，巨噬细胞生成并释放大量的促炎细胞因子，包括TNT-α、IL-1β、IL-6等，这些细胞因子的过量释放可引起机体自身组织损伤，导致过度的全身性炎症反应，最终导致多器官功能障碍以至死亡。肺脏是公认的较早发生功能障碍的器官。肺巨噬细胞包括分布在肺泡腔表面及肺泡腔内的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AMs)，分布在肺泡隔、支气管及血管旁的肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages，PIMs)和肺血管内的巨噬细胞。近来对PIMs研究的不断深入表明，在内毒素血症时PIMs较AMs更早受到LPS攻击，其吞噬功能、对补体的趋化作用及产生氧自由基的能力明显强于AMs，在肺组织炎症反应中起重要作用。因此，有效控制肺PIMs的过度激活将对减轻肺组织炎症反应起到积极的保护作用。 体内一些神经肽／激素如生长激素、生长抑素、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、降钙素基因相关肽、八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide，CCK-8)、神经肽Y、神经加压素等具有一定的抗炎及抗休克作用，构成了神经-内分泌-免疫调节网络的重要物质基础。本室一直致力于研究CCK-8的抗内毒素休克(endotoxin shock，ES)及抗炎作用，用CCK-8预处理ES大鼠可使平均动脉压回升而肺动脉压降低，并明显减轻ES时肺脏、肝脏、脾脏、肾脏间质水肿及白细胞浸润等炎性病理损伤，降低死亡率。CCK-8缓解ES大鼠早期肺动脉高压的作用与其减轻肺脏炎症反应有关。但有关CCK-8的抗炎作用及其机制尚未完全阐明，仍存在许多问题亟待解决。我们的新近研究表明肺巨噬细胞存在CCK受体基因表达，并可被LPS诱导表达 中文摘要增加，提示CCK七可能通过与其受体相互作用而干预LPS激活巨噬细胞的过程，从而调节炎症反应。 LPS介导巨噬细胞活化的信号通路错综复杂，但目前认为LPS一CD14TLR4一IRAKIKKIKB－－am＊x－h了rolnfiammatory cytoklnes是其中一条关键的信号通路，即LPS与巨噬细胞膜表面LPS受体CD14结合后，激活 Toll样受体 4（TOll like receptor 4，TLR4）并与之结合形成受体复合物，募集适配分子 MyD88，MyD88的死亡结构域再募集下游的L－l受体相关激酶（IL－lreceptor－associated kinase，I肌）到受体复合物。IRAK随后发生自磷酸化，从受体复合物解离，募集’－’v－’受体相关因子 6（1’i－ receptor－associated factor 6，T附6），］顺次激活下游激酶，包括 W－h诱导激酶（W－h－inducing kinase NIK）和丝裂素活化蛋白激酶a皿激酶激酶（mitogen－activated Protein klnase亿RKkinase kinase，MEKKI）。激活的MK或MEKKI 都能独自激活I皿复合物，导致Ich磷酸化降解，NF－h移位入核，启动目的基因转录。 因此本实验以体外培养的大鼠PIMS为对象，系统研究CCK8对LPS作用下细胞内 LPS——CD14——TLR4－I－I皿一Ith一h一prolnflammatory cytokines s条信号通路的影响，探讨 CCK七对 LPS诱导PIMS活化的作用及其信号通路，以揭示CCK七抑制LPS致肺组织炎症反应的作用机制。 ICCK－吕对LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞产生促炎因子及基因表达的影响 应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化SD大鼠PIMS，在加入或不加人CCK七的情况下，用LPS刺激细胞一定时间，用ELISA7L检测细胞培养上清中TNF咀的含量，用RTPCR。”技术分析细胞中 ’vmv咀及 ILl InRNA的表达。数据用王土s表示，用SPSS统计分析软件进行统计学分析，各组均数的比较行单因素方差分析（ANOVA人用最小显著差法 （leastsignifican differenCe，LSD）作两两比较，P＜O刀5为有显著性差异。结果显示：（）NMs自发性产生IN17亿的量非常少，低于我们检测的下限。LPS lm叭孵育 PIMs 12 h时，细胞上清中的 TNF心含量明显增多 门66．61土 124．40 pg／ml，P＜0刀1）；CCK．8（10｛ mol／L－10－‘mol／L）可剂量依赖性地抑制 LPS诱 2 中文摘要 导的 INF叱生成增多，10－‘mol／L CCK七轻微降低 LPS诱生的 INI7咀， 但无统计学意义（497＊ 1士 132．25 pg／ffil， P＞0＊5），而 10－’mol几 CCK－8 抑制LPS诱导的T’i－－Q生成达44％（3 19＊ 士62．ZI pg／ffil，P＜0＊1）， 10“mol几 CCK－8抑镐率达刀％ （16．99士63．49 p吻l，P＜0＊1），但仍 明显高于对照组（P＜0刀5人＊＊卜8单独孵育对TNF心的生成无明显影 响（P＞0刀5）。（2）LPS叭孵育 PIMs 3 h可导致细胞 1’i－’－a mRNA 表达明显增高（P＜O．01人而＊陀与＊＊义8共同孵育的NMs，其TNF咀 ＜ RNRNA表达水平明显低于＊＊S组，并呈剂量依