论文部分内容阅读
目的研究前列腺素E2（Prostaglandin E2, PGE2）对心肌细胞肥大的影响及其量效关系，探讨前列腺素E2诱导心肌细胞肥大的受体机制，为寻找抑制心肌肥大的潜在靶点提供理论依据。方法实验分为两部分：第一部分研究不同浓度PGE2对H9c2心肌细胞的肥大影响；第二部分探讨PGE2受体在PGE2诱导H9c2心肌细胞肥大中的作用。1.第一部分采用随机数字表法，将H9c2心肌细胞分为空白对照组（C1组）、小剂量PGE2组（D1组）、中剂量PGE2组（D2组）以及大剂量PGE2组（D3组）。各组细胞培养液中PGE2终浓度分别为0μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L及10μmol/L。2.第二部分采用随机数字表法，将H9c2心肌细胞分为空白对照组（C2组）、PGE2组、EP1和EP2受体阻滞剂组（A组）、EP4受体阻滞剂组（B组）、EP1和EP2受体阻滞剂联合EP4受体阻滞剂组（E组）。C2组不予任何处理；PGE2组在细胞培养液中加入PGE2（终浓度1μmol/L）；A组在细胞液中加入PGE2（终浓度1μmol/L）和AH6809（EP1及EP2受体拮抗剂，终浓度10μmol/L）；B组在细胞培养液中加入PGE2（终浓度1μmol/L）和GW627368X（EP4受体拮抗剂，终浓度10μmol/L）；E组在细胞培养液中加入PGE2（终浓度1μmol/L）、AH6809和GW627368X（终浓度均为10μmol/L）。3.以上各组分别给药孵育48小时后，通过Image J医学图像分析系统测量心肌细胞直径；BCA法检测心肌细胞总蛋白含量；采用免疫荧光法观察心肌细胞形态及体积；RT-PCR技术测量心钠肽（atrialnatriuretic peptide, ANP）mRNA及脑钠肽（brain natriuretic peptide, BNP）mRNA的表达水平。结果1.心肌细胞直径及总蛋白含量结果显示：PGE2处理后的心肌细胞直径及总蛋白含量均显著增加；同时，随着PGE2浓度的加大，心肌细胞的直径及总蛋白含量亦显著增加。在第二部分的实验中，与对照组（C2组）相比，其余各组心肌细胞的直径及总蛋白含量均显著增加；与PGE2组相比，EP1和EP2受体阻滞剂组（A组）无显著差异，EP4受体阻滞剂组（B组）及EP1和EP2受体阻滞剂联合EP4受体阻滞剂组（E组）心肌细胞的直径及总蛋白含量则显著降低。2.心肌细胞体积结果显示：与对照组相比，PGE2能显著增大心肌细胞的体积，且该作用具有量效关系。EP4受体阻滞剂组（B组）、EP1和EP2受体阻滞剂联合EP4受体阻滞剂组（E组）心肌细胞体积则较PGE2组显著减小。3. RT-PCR检测结果显示：小剂量PGE2（0.1μmol/L）组并未增加心肌细胞内病理性肥大标志基因ANP mRNA和BNP mRNA的表达水平，中剂量PGE2（1μmol/L）组及大剂量PGE2（10μmol/L）组心肌细胞内ANP mRNA和BNP mRNA的表达水平则显著提高。PGE2组、A组、B组及E组心肌细胞内ANP mRNA和BNP mRNA的表达水平均较对照组（C2组）显著提高；但与PGE2组相比较，EP4受体阻滞剂组（B组）、EP1和EP2受体阻滞剂联合EP4受体阻滞剂组（E组）心肌细胞内ANP mRNA和BNP mRNA的表达水平显著降低。结论1. PGE2能诱导心肌细胞的直径及总蛋白含量增加，细胞体积增大，且该作用具有量效关系，1μmol/L PGE2即可引发心肌细胞发生病理性肥大。2. PGE2受体EP4参与了PGE2诱导的心肌细胞肥大效应，上调病理性肥大标志基因ANP mRNA和BNP mRNA的表达，而该效应与受体EP1和EP2无关。除受体EP4外，仍有其他受体介导PGE2诱导的心肌细胞肥大效应，而EP3是最可能的受体之一。3.抑制PGE2的大量合成或阻滞PGE2受体EP4有望成为临床抑制心肌肥大新的治疗靶点。