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目的本研究应用免疫组织化学(免疫组化)方法,观察先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease, HD)患者扩张段(有神经节细胞段,NG)和痉挛段(无神经节细胞段,AG)以及非先天性巨结肠症病人(对照组)肠壁神经组织中BCL-2(B-lymphoma / leukemia-2)蛋白、神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)、神经细胞特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE )、S-100蛋白(Soluble protein 100,S-100)的表达结果,并采用图像分析技术对肠道神经系统进行定量分析;与苏木素-伊红(hematoxylin-eosine,HE)染色结果比较,加以分析,以帮助诊断和了解HD的病理生理改变。方法1、收集苏州大学附属儿童医院小儿外科2005-2007年先天性巨结肠病人肠管标本31例,包括HD扩张段与痉挛段。以10例年龄与之相符的无HD患儿的手术切除结肠标本作为对照组。所有标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋保存。2、分别对HD扩张段、痉挛段、对照组肠壁组织进行免疫组织化学染色和HE染色,计算机成像系统照相存盘,用图像分析软件(Image-Pro-Plus)判定NCAM、S-100在HD扩张段与痉挛段单位环肌层中的阳性染色面积百分比。结果1、先天性巨结肠扩张段HE和免疫组化染色,显微镜观察见:神经节细胞皆存在,肌层神经纤维有不同程度的排列改变,神经节细胞大小不等;痉挛段均未见神经节细胞。2、BCL-2在神经节细胞胞浆中呈强阳性表达,神经纤维不表达或弱阳性,而且在未成熟神经节细胞中也表达;NSE和NCAM在肠壁肌间、粘膜下神经丛中神经节细胞细胞及神经纤维中均有表达;S-100不表达于神经节细胞。3、定量分析:HD痉挛肠段缺乏神经节细胞;NCAM、S-100在HD痉挛段与扩张段环肌层表达的阳性面积率比较有明显差别(P<0.05),NCAM和S-100在痉挛段的表达明显减少。结论1、BCL-2免疫组化染色可很好的显示神经节细胞,尤其是未成熟神经节细胞,较经典的NSE、S-100免疫组化染色好,对鉴别HD与先天性巨结肠症同源病(HAD)有重要意义。2、NCAM对神经节细胞及神经纤维均染色,只表达于神经节细胞胞膜上,可与BCL-2的神经节细胞胞浆染色模式互补,更利于诊断HD。3、BCL-2在HD病变肠段表达减少,可能参与HD的发病机制。4、HD无神经节细胞段环肌层中NCAM表达减少,可能由环肌层中神经纤维数量减少引起。5、免疫组化染色图像分析技术可定量分析HD不同病变间的形态差异,这有助于对先天性巨结肠症的病理学研究以及临床诊断和鉴别诊断。