论文部分内容阅读
目的：在小鼠脑出血模型中，研究程序性坏死的特异性抑制剂necrostatin-1对脑出血引起的大脑损伤作用，探讨necrostatin-1对另外两种程序性细胞死亡方式（凋亡和自噬性细胞死亡）的影响。方法：采用胶原酶IV注入雄性ICR小鼠左侧纹状体建立脑出血（intracerebralhemorrhage, ICH）模型。在术前15min分别通过单侧侧脑室给药，并在伤后不同时间处死。首先利用组织缺损体积（lesion volume, LV）的方法评估necrostatin-1对ICH后组织损伤的作用；为了进一步验证脑组织的损伤是否与细胞损伤数相关，我们采用体视学显微镜观察并计数各组出血中心区以及周边区PI阳性细胞数。为了进一步探究necrostatin-1是否对其他两种程序性死亡方式（凋亡和自噬性细胞死亡）有影响，我们利用免疫印记法分别检测了凋亡活性相关蛋白（Bcl-2，cleavedcaspase-3）和自噬活性相关蛋白（Beclin-1，LC3-II，p62）的表达水平。此外，为了进一步验证necrostatin-1对ICH后凋亡和自噬活性的影响，我们也联合利用凋亡的抑制剂zVAD及自噬抑制剂3-MA，检测了cleaved caspase-3和LC3-II的表达。结果：Necrostatin-1能够减少ICH引起的组织损伤体积和PI阳性细胞数；免疫印迹结果显示necrostatin-1能够降低ICH后自噬和凋亡相关蛋白的表达或活性。3-MA可以同时降低ICH后LC3-II和cleaved caspase-3的表达，而zVAD只降低了cleaved caspase-3表达却增加了LC3-II的表达。结论：在小鼠脑出血模型中，necrostatin-1可通过影响自噬和凋亡的相关蛋白表达或活性来发挥神经保护作用。