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MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,参与植物的生长发育,初级和次级代谢,细胞形态的建成,激素信号转导,发育调节以及对生物和非生物胁迫的应答。在桑树脉带相关病毒侵染桑叶组织的转录组研究中发现7个差异表达的MYB基因,为了进一步研究这些基因的功能,本研究利用荧光定量PCR检测其在桑脉带病毒侵染植株的表达情况,克隆基因并运用生物信息学手段对其氨基酸序列进行分析,使用酵母单杂交验证其自激活性,并检测其在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,并对其同源基因进行烟草遗传转化,分析转基因烟草在干旱和病毒胁迫下的表现情况。研究结果如下:1.利用荧光定量PCR检测7个候选MYB基因的表达量,结果显示MaMYB4、MaMYB30和MaMYB308在病叶中的表达量明显地上调,是健叶中表达量的2.41、3.96和6.4倍,MaMYB16和MaMYB124表现为下调,健叶中表达量的0.5倍,MaMYB73和MaMYB1R1在病叶和健叶中转录水平无显著差异,与转录组测序结果基本相符。2.克隆7个候选MYB基因的ORF片段,并构建p GBKT7重组质粒转入酵母菌Y2H gold中,结果显示MaMYB4、MaMYB16、MaMYB30和MaMYB308具有自激活活性,其余三个基因自激活能力很弱或者无自激活能力。3.克隆了MaMYB4、MaMYB30和MaMYB308的c DNA序列并进行生物信息学分析,MaMYB308全长共1266 bp,编码区长度为1026 bp,含有一个25 bp的5′非翻译区(untranslatedregion,UTR)和215 bp的3′非翻译区,可编码341个氨基酸。MaMYB30编码区长度为864 bp,可编码288个氨基酸。MaMYB4含有一个825 bp的翻译区,可编码275个氨基酸。三个基因都包含两个DNA结合结构域,均为典型的R2R3-MYB类转录因子。4.利用荧光定量PCR分析MaMYB4、MaMYB30和MaMYB308的表达模式,发现三个基因均具有组织特异性,在根部表达量是茎和叶的20倍以上;在各种非生物胁迫刺激下,三个基因均出现了不同程度的应激性,其中对干旱、低温、SA和ABA诱导最为显著,最高时表达量可达到对照的80倍。5.将MaMYB4同源基因烟草Nt MYB4进行遗传转化,获得Nt MYB4过表达烟草13株,使用荧光定量PCR检测苯丙烷代谢相关基因在转基因和野生型中的表达,发现二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reduetase,DFR)和肉桂酸-4-羟基化酶(cinnamate-4-hydroxy-lase,C4H)在转基因植株中分别下调至野生型的0.003倍和0.48倍;对转基因植株进行抗旱性鉴定,结果发现转基因烟草对干旱的耐受力低于野生型烟草,说明Nt MYB4可能作为负调控因子参与烟草对干旱胁迫的调控;在TMV侵染后,野生型的发病时间早于转基因植株,且发病程度大于转基因植株,推测Nt MYB4参与烟草对生物胁迫的调控。