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一、CD123在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达与意义目的:监测CD123在B系急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)患儿中的表达,并分析不同因素与CD123表达的关系。方法:2013年5月至2014年12月收至我院的246例儿童骨髓标本,其中,B型急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)196例(包括初诊B-ALL174例,复发B-ALL22例),T型急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)34例,健康儿童16例(特发性血小板减少性紫癜康复后复检患儿),应用流式细胞术分析CD123及其它细胞表面标记物在这些病人中的表达情况,并分析B-ALL中性别、年龄、基因、初诊白细胞数、染色体、细胞成熟度对CD123表达的影响。结果:1、健康儿童CD123的表达为阴性的,T-ALL中极少数表达CD123,表达率为8.82%,我院196例B-ALL患儿多数表达CD123,表达率为92.82%。2、对我院B-ALL患儿分析发现91.8%B-ALL患儿同时表达CD123与CD19(CD123+CD19+),而且CD34高表达患儿CD123表达高于CD34低表达患儿(P<0.05)。3、CD123/10/34/19这一组合可检测125例B-ALL患儿化疗后白血病细胞微小残余病灶(MRD),有效率占58.01%。4、就诊时性别、年龄、白细胞数、是否复发对B-ALL细胞表面CD123的表达无明显影响(P均>0.05),超二倍体CD123表达高于正常核型(P<0.001),存在E2A/PBX、TEL/MLL基因的患儿较对应的基因阴性的患儿CD123表达低(P<0.05)。结论:1、CD123表达于多数B-ALL患儿骨髓幼稚细胞表面,可用于B-ALL微小残余病灶的监测,并可能作为靶点为复发及难治的B-ALL提供新的治疗手段。2、B-ALL患儿中,CD123表达与细胞成熟度成负相关;CD123过表达与超二倍核型有关;E2A/PBX或TEL/AML1基因阳性可能提示CD123相对弱表达。二、鼠抗人CD123单克隆抗体的制备目的:研制鼠抗人CD123单克隆抗体,为进一步研究人CD123分子的功能奠定基础。方法:比较几种表达CD123细胞株的CD123表达水平,选择表达水平高的细胞株SHI-1细胞株多次免疫小鼠获得免疫后的小鼠脾细胞与状态良好的骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,通过显微镜观察杂交瘤细胞的生长情况,同时通过CD123质粒转染L929细胞成功制备L929-CD123细胞株。采用流式细胞术,通过间接免疫荧光的方法,应用SHI-1细胞株、L929-CD123细胞株分别初步筛选、进一步筛选上清中含抗CD123单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞,并且通过有限稀释法获取单克隆的杂交瘤。我们将制备的杂交瘤通过小鼠腹腔注射的方法,收集小鼠腹水并进行纯化后,对MAb类型鉴定并与商品化抗体比较其效价。结果:CD123质粒有效转染L929细胞株,制备出L929-CD123细胞株;SHI-1免疫后的脾细胞与骨髓瘤细胞融合通过流式筛选制备出单克隆的分泌CD123抗体的杂交瘤细胞(克隆号C1409);C1409抗体具备较高的效价。结论:成功获取一株能稳定持续分泌抗人CD123单克隆抗体的杂交瘤,其分泌的抗体具备较高的效价,可用于流式细胞术分析。