水稻OsVDAC4互作蛋白筛选及OsVDAC5启动子表达模式分析

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电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channels,VDACs)是广泛存在于线粒体上的一种孔道蛋白,可以控制代谢产物、无机盐的运输,维持内环境的稳态,并与细胞凋亡有关。本实验室前期鉴定出了8种水稻VDAC蛋白,本实验主要围绕OsVDAC4和OsVDAC5来进行,主要取得以下2个方面结果:1.将OsVDAC4全长序列连接两个诱饵蛋白载体pBT3-N和pBT3-SUC,膜蛋白酵母双杂交结果表明pBT3-SUC-OsVDAC4可用于文库筛选。从YTB幼穗cDNA文库中筛选出4个可能与OsVDAC4互作的蛋白,进一步点对点杂交实验证明只有LOC_Os02g06640.1和LOC_Os06g51220.2与OsVDAC4互作,暂命名为OsV4IP1和OsV4IP2。生物信息学分析发现OsV4IP1蛋白有14次或是22次跨膜,或是没有跨膜。OsV4IP2蛋白没有跨膜结构。OsV4IP1和OsV4IP2都定位在核上。2.对OsVDAC5的ATG上游4500 bp序列进行生物信息学分析后,将其分为4个5’部分缺失片段pB、pC、pD和pE。将4个片段分别连接双元表达载体DX2181,通过农杆菌介导得到转基因阳性植株。目前只得到了pC、pD和pE表达GFP的阳性植株。对部分植株进行荧光观察结果表明pC、pD和pE在根的厚壁组织、内皮层、中柱表达,pC和pD在叶的表皮和中柱,叶鞘的韧皮部、叶舌、叶节,颖壳,花蕊表达。在根的皮层薄壁组织,叶肉,叶鞘内部都不表达。
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