柑橘砧木‘蒲江香橙’对黄龙病病菌的生理生化响应

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柑橘是我国栽培面积最大产量最高的果树,其生产正受到黄龙病的严重威胁。黄龙病自记载以来的百余年中,持续给全球的柑橘产业带来了严重的经济损失。因其致病菌Candidatus Liberibacter spp.难以纯培养,致病机理不甚了解,加之其传播隐蔽,具有潜伏期,且生产上缺乏对其有抗性的柑橘品种,黄龙病素有柑橘‘癌症’之称。‘蒲江香橙’来自于四川省蒲江县的野生香橙(Citrus junos Sieb.ex Tanaka),是新发掘的柑橘砧木品种,其在生产上具有诸多优点,但其对黄龙病的响应情况未知。本研究通过嫁接侵染,探究了‘蒲江香橙’对黄龙病菌的生理生化响应。具体研究结果如下:1)黄龙病对‘蒲江香橙’地下部根系的损害早于地上部叶片。在接毒15周后,地上部新稍长度和地下部根系须根的长度,均明显缩短,地上部差异不明显,其叶片长度、宽度、叶面积、新稍数并没有显著差异,但根系结构已经发生了显著改变,大量须根丢失。对其无症状叶片进行病菌滴度绝对定量发现此时‘蒲江香橙’的载毒量达到3.96-7.66×10~5拷贝/μg DNA。2)黄龙病对‘蒲江香橙’的维管束结构,光合能力,抗氧化能力造成了损害。在接毒15周后,‘蒲江香橙’韧皮部局部有塌陷坏死迹象,韧皮纤维组织的细胞壁有所增厚,韧皮纤维细胞层数有所增加。同时观察到淀粉粒和胼胝质的明显积累,维管束筛孔未完全堵塞。叶片气孔限制值显著升高,蒸腾速率、气孔导度、净光合速率和叶绿素b含量极显著降低。抗氧化酶中CAT和SOD酶活性活性有所下降。3)‘蒲江香橙’叶片和根系对于感染黄龙病后的代谢物变化存在差异。氨基酸中,感病后叶片和根系的亮氨酸和异亮氨酸积累都显著增加,谷氨酸和甲硫氨酸积累显著减少。除此外,根系中半胱氨酸和苯丙氨酸积累显著增加,天冬氨酸积累显著减少。半胱氨酸只在根系中检出,其感病后差异显著,积累量是对照的4倍以上。在检出的46种糖及其衍生物中,有18种在叶片与根系中,表现出完全相反的变化趋势。在检出的42种脂肪酸及其相关产物,有13种在叶片中差异积累,20种在根系中差异积累,其中只有5种化合物在叶片和根系中具有相同的变化趋势。代谢产物在叶片中主要在赖氨酸代谢,黄酮和黄酮醇生物合成,托烷、哌啶和嘧啶生物合成,莽草酸途径生物碱合成以及卟啉与叶绿素代谢途径显著富集;在根系中主要在萜烯类化合物,萜类和聚酮衍生生物碱合成,c AMP信号通路,乙醛酸和二羧酸盐代谢途径显著富集。4)鉴定了‘蒲江香橙’中SAMP基因,并对其进行了相对定量。从‘蒲江香橙’中克隆了SAMP基因,并发现其存在三种转录本,进一步通过同源建模发现转录本t1因其蛋白结构中存在的空间位阻,可能不具备抗菌活性,而t2、t3因终止密码子的插入,导致翻译提前终止,可能不具备翻译成活性SAMP的能力。
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