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背景与目的Usher综合征(USH)又称感音神经性耳聋-视网膜色素变性综合征,是常染色体隐性遗传的疾病,发病率为3.2~6.2/100,000人,特点为感音神经性耳聋、视网膜色素变性和不同程度的前庭功能障碍。Usher综合征具有临床和遗传异质性,是人类遗传性聋-盲和视网膜色素变性最常见的原因。临床上主要表现为不同程度的感音神经性耳聋和视网膜色素变性,伴或不伴前庭功能障碍。根据感音神经性耳聋的严重程度和是否合并前庭功能障碍将Usher综合征分为三型,其中以Usher综合征2型最多见,外显率为100%。迄今为止,已确定与Usher综合征相关的致病基因14个,USH2A是2型USH最常见的致病基因,占2型Usher综合征患者的74~90%。因此,USH2A基因的测序筛查是诊断2型Usher综合征首选。资料与方法收集2016年5月就诊于郑州大学第一附属医院的一个Usher综合征三代家系。家系成员共8名,包括2名患者,6名正常家系成员,2名患者均为男性。采集7名家系成员血样,同时随机搜集100名与本家系无关的健康体检者。对全部研究对象进行体检,排除全身性疾病。家系7名成员进行眼科、耳科检查,包括视力、裂隙灯检查、眼底照相、视网膜电图、光学相干断层扫描、视野、前庭功能评估和纯音测听。本研究已经郑州大学伦理委员会批准且所有成员均已签署受试知情同意书。签署知情同意书后,抽取全部7名家系成员外周静脉血3ml,用血液基因组DNA提取试剂盒(天根生化,北京)提取DNA,紫外分光光度计定量。采用北京迈基诺公司提供的包括136个已知遗传性视网膜疾病相关致病基因的基因测序试剂盒,其中包含已克隆出的12个Usher综合征发病相关的基因。每个样本提取3μg DNA作起始量,进行超声片段化,再进行末端补平、两端加A、连接adoptor、纯化,文库质量检测后进行杂交、洗脱、LM-PCR扩增对捕获文库富集,然后利用Illumina Hiseq 2500进行高通量测序。测序结果通过HGMP数据库、CCDS、NCBI SNP、dbSNP、1000Genomes、人基因组数据库(HG19)对SNP进行注释,确定基因突变位点后进而分析。结果根据眼科及耳科临床检查、家系调查、家系谱,对该家系患者进行临床诊断。所有患者均表现为眼部并听力异常不伴有全身系统性疾病。根据Usher综合征的分型诊断标准将两位患者确诊为Usher综合征2型,家系特征符合常染色体隐性遗传。家系中2例患者临床表型相似,包括青少年期出现的夜盲,眼底呈典型的色素变性的改变:周边视网膜骨细胞样色素沉着,视野进行性向心性缩小,双耳呈现中到重度的听力损伤。通过二代测序确定USH2A基因上c.5459T>C(p.M1820T)、c.1190T>A(p.I397K)和c.802G>A(p.G268R)和GPR98基因的点突变c.4703G>A(p.S1568N)和c.15701A>G(p.K5234R)的复合杂合性突变。用本家系无关的正常人及数据库作验证,结果提示正常人对照不存在这5个点突变。对家系其他成员的DNA样本进行Sanger测序,对先证者的突变位点进行验证并进行基因型-表型共分离分析。共分离分析结果提示UHS2A基因上的复合杂合性突变在该家系中与疾病表型共分离,而GPR98基因的2个突变位点基因型与表型未共分离,提示可能为非致病性突变。结论1.本研究中,我们发现一个在USH2A基因上新的复合杂合突变位点(c.5459T>C(p.M1820T)、c.1190T>A(p.I397K)和c.802G>A(p.G268R))。2.这个发现不仅扩增了USH2A基因的突变谱,同时也对Usher综合征的分子生物学研究、基因咨询、产前诊断等提供参考。