人工合成聚合物传递shRNA-IGF1R特异性抑制兔平滑肌细胞增殖迁移的体内外实验研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wxyz0123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:评价聚合物作为基因载体介导小发夹结构RNA (shRNA)对兔平滑肌细胞体内外增殖和迁移的抑制作用。方法:检索IGF-1R的基因序列,依照此序列构建同时表达绿色荧光蛋白基因(GFP)和特异性针对兔平滑肌细胞胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因的shRNA的质粒pGFPshlGF-1R,用聚合物作为载体,将质粒pGFPshlGF-1R转染进平滑肌细胞,评价人工合成聚合物的转染效率;根据上述得到转染条件,将质粒pGFPshlGF-1R以聚合物作为载体转染进兔平滑肌细胞,同时与单纯的脂质体转染方法相比较,通过western blot检测两种转染方法对平滑肌细胞中IGF-1R蛋白表达下调情况;在新西兰大兔的颈静脉间位移植模型中,局部应用质粒pGFPshlGF-1R与聚合物的复合物,分子水平用western blot检测聚合物载体体内转染24h、48h、72h后,颈静脉桥组织中IGF-1R蛋白表达受抑情况;4周后,将兔子处死,取静脉桥标本,10%甲醛固定,石蜡包埋做HE染色,宏观上计算内膜增厚程度和静脉桥管腔面积,评价聚合物质粒pGFPshlGF-1R体内抑制平滑肌细胞增殖和内膜增厚,以及对静脉桥再狭窄的预防效果。结果:不论脂质体转染还是应用聚合物转染方式,都可以将质粒pGFPshlGF-1R转染进平滑肌细胞内。相对于空白对照组和脂质体转染,聚合物作为载体展现了较高的效率。流式细胞结果表明,绿色荧光蛋白基因(GFP)阳性的细胞数占38.1±1.0%,而在脂质体转染组绿色荧光蛋白基因(GFP)阳性的细胞数只有11.0±4.1%。shRNA能明显的抑制IGF-1R的蛋白表达(p<0.01),相比对照组,干扰率达10.4±0.5%(脂质体转染组)和49±2.0%(聚合物转染组);在体内,聚合物转染组24h、48h、72h干扰效率差异性无统计学意义(p>0.05),分别达77.0±3.6%,65.6±4.9%,和78.0±4.3%。聚合物基因转染显著减少静脉桥厚度(未处理组:0.7±0.1mm2, shIGF1R组:0.48±0.15mm2,P<0.02),表明聚合物基因转染可以作为一种有效可行的用于静脉桥移植术后再狭窄预防措施。体内抑制IGF-1R的表达,显著减低细胞凋亡增殖相关细胞通路信号蛋白如ERK1/1,AKT的磷酸化。结论:人工合成聚合物作为基因载体的转染可能会成为靶向静脉桥再狭窄预防及治疗的重要的安全的转染方法。
其他文献
目的:通过动物实验研究探讨扩张囊外纤维包膜对扩张皮瓣远期回缩率及生物力学特性的影响,并探讨其可能的规律及机制,为临床手术过程中扩张囊外纤维包膜的去留提供理论指导。方
目的通过总结分析我们在肝内胆管结石手术治疗中应用术中超声进行辅助的经验,探讨术中超声在肝内胆管结石手术中的应用价值。方法搜集我院2012年3月至2014年2月在手术治疗中应
以市售哈密瓜为原料,常温下,配置不同浓度的盐、糖、醋溶液对鲜切哈密瓜进行浸泡处理后,选用3种不同的薄膜进行包装,通过每两天对鲜切哈密瓜的失重、色差等指标进行测试并判断其
椎间盘突出是老年人常见病多发病,椎间盘突出治疗方法多样,近年来,射频热凝联合臭氧融合术因其能多次重复治疗,此种治疗方法为多数椎间盘突出患者所接受。老年人常合并高血压
研究了我国城市化、工业化进程中农业副业化、农民兼职化、农村老龄化、村庄空心化现象的根源,找出了传统农民转化为新型农民的素质瓶颈。认为培养新型农民要循序渐进、注重
1、目的:本实验在建立SD大鼠大部肝切除术(Major hepatectomy, MH)模型的基础上,术前对受体大鼠给予间断低氧预适应(Intermittent hypoxic preconditioning, IHP)干预,研究低
目的探讨克氏针及可吸收螺钉在治疗儿童肱骨外髁骨折手术中的疗效及应用价值。方法分析我院2010年01月~2012年01月期间收治的肱骨外髁骨折患儿,根据儿童肱骨外髁诊断标准,共搜集
融资融券制度从2010年在我国正式推行至今已经有了五年多的时间,越来越多的学者开始关注并且对融资融券业务进行研究,本文主要对一些学者的相关研究做一个总结,并且结合中国
目的探讨乌司他丁对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将72只SPF级大鼠随机分为3组:对照组、缺血再灌注组及缺血再灌注-乌司他丁组,每组24只。各组根据再灌注
基于对江苏省沭阳县7个样本村的实地调研,全面分析了农村互助资金组织的产生背景和运作机制,进而指出其优势和不足。