【摘 要】
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养猪业是畜牧业生产的重要经济支柱,而仔猪水肿病严重威胁着仔猪的生长,发育,发病甚至大量死亡.水肿病在世界各地都有发生,而目前尚没有一种有效的治疗方法.由于不同地区流行
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养猪业是畜牧业生产的重要经济支柱,而仔猪水肿病严重威胁着仔猪的生长,发育,发病甚至大量死亡.水肿病在世界各地都有发生,而目前尚没有一种有效的治疗方法.由于不同地区流行分布的水肿病毒力因子(SLTⅡe)的类型不同,同时引发水肿病的原因非常复杂,限制了疫苗的使用范围.用抗生素治疗水肿病,如用药不慎,会导致病情加重或引发其它的并发症.因此,研制出一种高效的针对贵州省猪水肿病的疫苗势在必行.本文以贵州分离的产Ⅱ型志贺样毒素突变体(SLTⅡe)、产热敏肠毒素(LT,Heat-labile Enterotoxin)大肠杆菌为基础,构建了编码SLTⅡeB和LTB成熟肽的融合基因SLTⅡ eB-LTB(全长530bp);SLTⅡ eB-LTB插入表达性载体pQE30中,转化受体菌M15,经过筛选鉴定后获得含重组质粒的菌株M15pQE30/SL6;经Western印迹证实融合蛋白中含有SLTⅡ eB;通过对比实验获得了融合基因表达的最佳条件;在此条件下制备包涵体,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,回收纯化目的蛋白;以纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,制备了抗SLTⅡeB和LTB的高效价抗体(1:80000);同时以融合蛋白为抗原免疫昆明小白鼠,ELISA分析表明在小鼠体内产生了效价为1:40000的抗体,免疫小鼠以野生型SLTⅡe毒素的粗提物攻毒,保护率为100％.;用野生型LT粗提物攻毒,保护率为100％;用野生型SLTⅡe和LT混合物攻毒,保护率为80％,各对照组小鼠全部死亡.结果表明本文制备的SLTⅡeB和LTB融合蛋白具有很好的免疫原性,能有效地保护产SLT Ⅱe和LT毒素的野生型强毒株的攻击,为制备同时抵抗猪水肿病和肠毒素所致的腹泻两种疾病的基因工程疫苗奠定了基础.
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