论文部分内容阅读
目的在大鼠哮喘模型上观察甲磺司特(Suplatast Tosilate,IPD)干预前后哮喘大鼠气道炎症、肺组织白细胞介素5(Interleukin-5,IL-5)基因表达以及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids,BALF)中IL-5的含量的变化,探讨甲磺司特在哮喘防治中的可能作用机制。方法1.取雄性成年SD大鼠(4周龄,体重200±20g)50只,分为五组:对照(Control)组、模型(Model)组、布地奈德(budesonide,BUD)组、IPD早期干预组即IPD(A)组和IPD晚期干预组即IPD(B)组,各组10只。2.在实验0天(即致敏前)尾静脉采血测定外周血嗜酸性粒细胞(eosinophil,,EOS)总数与百分比。除Control组以外的其余四组大鼠分别于第1天和第8天腹腔注射10﹪OVA混合液1ml(含OVA 100mg、氢氧化铝100mg及灭活百日咳杆菌苗5×109个作为免疫佐剂)致敏。2周后再进行激发,2﹪OVA泵雾化吸入,10分钟/次,每天1次,连续7天,构建大鼠哮喘模型,Control组致敏和激发均以生理盐水代替。BUD组每次激发前BUD泵雾化吸入,IPD(A)组和IPD(B)组分别从致敏和激发阶段开始予IPD(50mg/kg.d)灌胃。3.末次激发24小时内麻醉动物,再次尾静脉采血测定外周血EOS总数与百分比,气管插管后行气道高反应性(airway hyper responsiveness,AHR)检测;检测后立即腹主动脉放血处死大鼠,取各组动物BALF及肺组织,分别测定BALF中炎性细胞总数和EOS百分比、通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测肺组织IL-5mRNA的表达、酶联免疫吸附试验法(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定BALF上清液中IL-5的含量,并分析IL-5与EOS、AHR之间的相关性,结合肺组织病理学检查分析气道炎症状态。结果1.大鼠哮喘模型的建立:与Control组相比,在激发过程中,Model组大鼠逐渐出现烦躁不安、挠鼻、呼吸急促、点头状呼吸、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应迟滞等哮喘样表现。激发7天后,Model组大鼠动物气道高反应性测定显示气道反应性增高,与Control组比较差异有统计学意义(P<0.05);肺组织病理显示:气道周围明显炎症改变、支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。BALF细胞学显示EOS百分比明显增加(P<0.05),提示哮喘大鼠模型复制成功。2.气道高反应性测定:各组大鼠用盐酸组胺激发,在同一激发浓度,Model组、BUD组、IPD(A)组和IPD(B)组气道阻力明显高于Control组(P<0.05) ,差异有统计学意义;与Model组相比,BUD组、IPD(A)组和IPD(B)组气道阻力明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。而IPD(A)组与BUD组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。3.病理组织学检查:Model组气道周围炎症改变明显、支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。与Model组比较,IPD(A)组、IPD (B)和BUD组气道周围炎症明显减轻,气道周围炎症细胞浸润、气道分泌物减少、支气管壁增厚及上皮细胞脱落现象明显改善。4. BALF细胞学检测:IPD(A)组、IPD(B)组和BUD组炎性细胞总数及EOS百分比明显低于Model组(P<0.05);IPD(A)组与BUD组之间炎性细胞总数及EOS百分比则差异无统计学意义(P>0.05)。5.外周血EOS总数与百分比:实验前(即致敏前):5组大鼠外周血EOS的总数与百分比无明显差异(P>0.05)。实验后(即激发7天后):IPD(A)组、IPD(B)组和BUD组外周血EOS总数与百分比明显低于Model组(P<0.05);IPD(A)组、IPD(B)组和BUD组外周血EOS总数与百分比三组之间差异无统计学意义(P>0.05)。6. BALF上清液中IL-5含量:致敏、激发后Model组BALF上清液中IL-5的含量较Control组明显升高(P<0.05);IPD(A)组、IPD (B)组和BUD组IL-5含量明显低于Model组(P<0.05);IPD(A)组和BUD组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。7.肺组织IL-5mRNA表达量:致敏、激发后Model组肺组织中IL-5mRNA的表达较Control组明显升高(P<0.05);IPD(A)组、IPD (B组)和BUD组IL-5mRNA表达量明显低于Model组(P<0.05), IPD(A)组和BUD组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。8. BALF中IL-5含量与气道阻力成正相关(r=0.919,P<0.01);肺组织IL-5mRNA的表达量与气道阻力成正相关(r=0.909,P<0.01);BALF中IL-5含量与EOS百分比成正相关(r=0.955,P<0.01);BALF中EOS百分比与气道阻力成正相关(r=0.865, P<0.01);BALF中IL-5含量与BALF中炎性细胞总数成正相关(r=0.955,P<0.01);肺组织IL-5mRNA的表达量与BALF中IL-5的含量成正相关(r=0.973,P<0.01)。结论1. IPD能够降低哮喘大鼠气道高反应性,部分抑制气道炎症、抑制EOS的募集。2. IPD能抑制肺组织IL-5的基因转录,降低BALF中IL-5的含量。3. IPD早期干预作用与BUD有相似的抗炎效应。IPD晚期干预也有部分抗炎作用。.4. IPD降低气道高反应性、抑制气道炎症可能是通过降低IL-5的合成实现的,并且在基因转录水平产生影响。