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目的:建立戊四氮诱导的癫痫大鼠模型,评价化浊解毒疏肝方对戊四氮诱导的癫痫大鼠的抗癫痫作用以及对认知障碍的影响。方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,适应性饲养7天后,根据随机数字表法分为正常组7只、戊四氮组41只,对戊四氮组的大鼠采用戊四氮(Pentetrazol,PTZ,40mg/d)每天腹腔注射,以诱导大鼠的癫痫发作,然后用Racine分级对癫痫发作程度进行评分,连续3次注射戊四氮后Racine分级均达到4级及以上视为造模成功。然后筛选出诱导成功的癫痫大鼠,采用随机数字表的方式将造模成功的大鼠随机分成4组(每组7只):模型组(Model),丙戊酸钠组(VPA,300mg/kg/day),化浊解毒疏肝方高剂量组(H-HJSD,10.8g/kg/day),化浊解毒疏肝方低剂量组(L-HJSD,5.4g/kg/day),进行21天的药物治疗,Control组和Model组给予生理盐水,VPA组给予丙戊酸钠(18.9mg/kg/day),H-HISD和L-HISD组给予相应的化浊解毒疏肝方溶液(10.8g/kg/day或5.4g/kg/day)。对造模成功的大鼠每5天注射一次戊四氮以维持点燃状态。观察治疗后各组大鼠的癫痫发作情况。在治疗结束的第1天,进行水迷宫实验。水迷宫实验分为两部分,分别是定位航行和空间探索。通过对比癫痫大鼠在目标象限的游泳速度,逃避上台的潜伏期和穿越平台的次数,观察治疗后癫痫大鼠的空间学习记忆能力;水迷宫结束后,进行新物体识别实验,新物体识别实验分两部分,分别是熟悉期和实验期,通过记录大鼠探索新、旧两个物体所花耗的时间,计算出辩识指数(discrimination index,DI),观察治疗后癫痫大鼠的短期的记忆能力。药物治疗后,对癫痫大鼠的海马CA1区进行HE染色,观察海马组织的病理损伤;Nissl染色,观察神经元损伤;通过对海马CA1区NeuN进行免疫荧光染色,检测神经元存活的情况;通过对海马组织进行ELISA测定,检测IL-1β、IL-6炎性因子的表达;通过对海马组织进行Western Blot测定,检测NLRP3,Caspase-1的相对蛋白表达,分析化浊解毒疏肝方对癫痫大鼠海马神经的保护作用。统计学方法:计数资料以百分率(%)表示,组间比较采用卡方检验。计量资料以均数±标准差(X±S)表示,组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),检验水准α=0.05。结果:共对41只大鼠进行造模,有8只因癫痫剧烈抽搐而造成死亡,5只未达到4级发作而排除在外,剩余28只大鼠均成功点燃癫痫。正常对照组大鼠无癫痫发作。治疗前,各组大鼠癫痫发作的潜伏期无显著性差异(P>0.05)。治疗后,与模型组相比,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠的发作的潜伏期延长(P<0.05),而VPA组和H-HJSD组大鼠癫痫发作潜伏期明显低于L-HJSD组(P<0.05),且VPA组癫痫发作潜伏期与H-HJSD相比无显著差异(P>0.05)。HJSD组大鼠在第15天和第20天以剂量依赖的方式降低了癫痫发作的严重程度得分,与模型组相比,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠发作等级逐渐降低(P<0.05);且VPA组癫痫发作等级的降低与H-HJSD组相比无显著性差异(P>0.05)。在水迷宫实验的定位航行实验中,每组的逃避上台的潜伏期在训练的五天内逐渐减少,与对照组相比,模型组的逃生潜伏期明显延长(P<0.01)。与模型组相比,VPA和H-HJSD治疗显着降低了逃避上台的潜伏期(P<0.01)。在空间探索测试中,与对照组相比,模型组显着减少了穿越平台的次数(P<0.05)。VPA和HJSD均有效地增加了平台穿越次数(P<0.05和P<0.01)。在新物体识别实验中,与对照组相比,模型组对新物体辨别指数显著降低(P<0.05);给予药物治疗后,与模型组相比,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠新物体辨别指数均有明显增加(P<0.01),而VPA组和H-HJSD组大鼠新物体辨别指数明显高于L-HJSD组,且VPA组癫痫大鼠的新物体辨别指数与H-HJSD组相比无显著差异(P>0.05)。HE染色结果显示,正常组海马CA1区神经细胞数量丰富,形态饱满,排列顺序规则整齐,细胞膜清晰透彻。细胞核呈蓝色圆形或椭圆形,核仁清晰可见,整体结构规整。模型海马CA1区神经细胞数量减少,排列无序,结构疏松不整齐,细胞间隙无规则并且增宽,细胞膜模糊。胞体肿胀变形,轮廓不清,细胞核呈固缩样变,胞质内染色变深。VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠海马CA1区组织中细胞排列与模型组相比较为规整,细胞间隙明显缩小,数量有所增加,细胞层次较清晰,胞核轻微固缩,胞质染色略深。Nissl染色结果显示,对照组大鼠海马CA1区组织中锥体细胞及其顶树突排列排列整齐、紧密规则,胞浆中Nissl体丰富。模型组大鼠海马CA3区组织中锥体细胞层出现细胞明显缺失现象,锥体细胞胞浆内的Nissl体减少甚至消失。VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠海马CA1区组织中锥体细胞排列较模型组细胞排列趋于整齐,Nissl体较为丰富,且L-HJSD组大鼠海马神经元损伤明显重于H-HJSD和L-HJSD组。NeuN免疫组织荧光染色结果显示:与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区NeuN表达显著减少(P<0.01);与模型组相比,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠NeuN表达显著增加(P<0.01)。VPA组和H-HJSD组大鼠NeuN表达量明显高于L-HJSD组,且VPA组的NeuN表达量与H-HJSD组相比无显著差异(P>0.05)。ELISA结果显示:与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6的表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠IL-1β和IL-6表达显著降低(P<0.05),VPA组和H-HJSD组大鼠IL-1β和IL-6表达明显低于L-HJSD组,且VPA组的IL-1β和IL-6表达与H-HJSD组相比无显著差异(P>0.05)。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组NLRP3、Caspase-1的蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,VPA组、H-HJSD和L-HJSD组大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白相对达量显著降低(P<0.05)。VPA组和H-HJSD组大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量明显低于L-HJSD组,且VPA组的NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量与H-HJSD组相比无显著差异(P>0.05)。结论:1.采用腹腔注射戊四氮的癫痫模型点燃方法,大鼠表现出较高等级的癫痫发作,提示造模成功。化浊解毒疏肝方解毒疏肝方能有效降低癫痫大鼠的癫痫等级和延长发作潜伏期,提示化浊解毒疏肝方能够起到抗癫痫的作用,并且疗效与丙戊酸钠相当。2.采用戊四氮诱导的癫痫大鼠存在记忆障碍的情况,并且化浊解毒疏肝方能够有效的缓解癫痫大鼠的认知障碍。3.戊四氮癫痫大鼠的海马CA1区存在明显的病理损伤和神经损伤,化浊解毒疏肝方能够有效的逆转这些损伤。4.化浊解毒疏肝方通过影响NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路蛋白变化而产生神经保护的作用,从而发挥抗癫痫的作用。