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医学影像技术及设备的不断发展和完善,促进了医学诊断技术和方法的不断创新和进步。各种医学影像诊断技术,已从单一依靠形态变化进行诊断,发展成为集形态、功能和治疗为一体的综合诊断体系。但是,由于各种影像技术在时空分辨率方面各有优缺点,没有任何一种成像方式可以全面而完整地获取人体内部生物信息,因此,多种成像模式的联合使用具有互补优势。
超声诊断相对安全、轻便、快速、检测费用低,是目前全世界应用最广泛的医学诊断技术,与X——射线影像(CT)相比,超声诊断(US)更加安全;与磁共振成像(MRI)相比,更加价廉。尤其,超声微气泡造影剂的引入,极大地促进了超声诊断技术的进一步发展,使其在各种脏器的组织灌注、炎症检测和肿瘤检测等方面,获得到广泛的研究和临床应用。此外,还可在微气泡表面修饰靶向特异性分子或药物,实现分子显影或药物治疗。但是,超声波易受多种因素的干扰,对组织解剖结构关系的显示不如CT和MRI等,因此,将超声和其他诊断成像模式相结合,能够为临床医生提供更丰富、准确的信息,从而提高疾病诊断的准确性。
本论文主要设计和制备了装载超顺磁性Fe3O4纳米颗粒的聚合物微气泡造影剂,系统研究了其US和MRI成像特点,以期利用一种微气泡造影剂,实现US和MRI双重显影增强效果。通过对所得US和MRI图像的联合分析,获取更多相关的结构和功能信息,达到对疾病的早期、准确诊断。
具体说来,本论文开展了如下工作:
1.采用超声空化和乳液法制备了聚合物微气泡造影剂,该微气泡的结构为:气体核心,装载Fe3O4纳米颗粒的聚乳酸中间层和聚乙烯醇水溶液外层。实验中设计了包裹不同浓度Fe3O4纳米颗粒(0,5.73,12.06,33.14,54.23,86.47,105.69,122.85,145.24,180.23 μg/ml)的微气泡,并对其进行了粒径、磁滞回线、显微形貌等结构表征和稳定性考察。
2.搭建体外超声显影装置,采用频率为3.5MHz的临床超声诊断仪,进行微气泡体外超声显影成像实验,分别考察了壳膜中未包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡、包裹不同浓度Fe3O4纳米颗粒的微气泡体外超声显影成像情况,对所得图像进行平均灰度的定量计算和比较,寻找包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡体外超声显影的优化条件;同时对包裹不同浓度Fe3O4纳米颗粒的微气泡进行体外声学参数研究,探讨了微气泡超声成像时,壳膜中Fe3O4纳米颗粒影响超声成像的相关物理声学特性。
3.基于微气泡体外超声显影成像的实验结果,进一步进行了微气泡造影剂在家兔体内的超声成像实验研究。经家兔耳缘静脉分别注入未包裹Fe3O4纳米颗粒和包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡后,观察随着时间的变化,家兔肝脏超声显影图像增强效果。实验结果表明,微气泡以及壳膜中Fe3O4纳米颗粒在家兔肝脏的聚集,都可能影响微气泡造影剂的超声显影图像质量和持续时间。通过定量计算所得图像感兴趣区域(ROI)的平均灰阶,初步探讨了包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡体内超声成像特性。
4.采用1.5T磁共振成像仪,对制备的微气泡进行体外磁共振成像研究,考察了壳膜中未包裹Fe3O4纳米颗粒,以及装载不同浓度Fe3O4纳米颗粒的微气泡体外磁共振T2成像效果。通过测定磁共振成像后,图像的横向弛豫时间(T2),定量计算相应的横向弛豫率(R2),实验发现,包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡具有磁共振T2成像的能力:微气泡对磁共振横向弛豫率(R2)的影响与微气泡浓度、膜壳中Fe3O4纳米颗粒的含量之间都存在一定的函数关系。
5.基于体外磁共振成像实验结果,采用7T磁共振成像仪,对微气泡进行了大鼠肝脏磁共振显影实验。经尾静脉分别注射未包裹Fe3O4纳米颗粒和包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡造影剂,进行磁共振T2成像扫描,结果发现,随着时间的变化,大鼠肝脏组织T2图像的信噪比出现了显著的变化,说明包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡造影剂具有良好的磁共振大鼠肝脏成像效果。
6.最后,研究了中等超声能量辐照下,包裹Fe3O4纳米颗粒的微气泡对SMMC-7721肝癌细胞的作用,以及该过程中细胞发生的生物效应原理。实验表明,在较高声强(声压Psp>0.1MPa)时,微气泡破裂,释放出的Fe3O4纳米颗粒可以被肿瘤细胞摄取,这种被Fe3O4纳米颗粒标记的肿瘤细胞具有磁共振T2成像的能力。同时,微气泡在细胞周围产生强烈空化效应,导致细胞膜出现声穿孔孔洞或渗透性增加,使Fe3O4纳米颗粒能更容易被肝癌细胞摄取。但是,不同声压(0.19,0.25,0.38,0.48MPa)条件下,细胞的摄取效率不同,只有在适当超声条件下(短波激发频率1MHz,每个发射短波中包含20个周期,声压Psp=0.25MPa),才会导致细胞膜发生可修复声穿孔,从而在最大效率摄取Fe3O4纳米颗粒的同时保持细胞活性。通过采用藻红蛋白标记的溶酶体膜相关蛋白(PE-LAMP-1)进行免疫荧光染色实验,结果发现,在适当超声能量辐照下,细胞膜表面形成的孔洞可通过溶酶体膜相关蛋白(LAMP-1)进行自我修复。