水稻条纹病毒浙江分离物的研究

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近年来,水稻条纹叶枯病在我国水稻种植区大范围发生,尤以东部的江苏、浙江两省损失最为严重。本研究采集了浙江省7个市/县的水稻条纹病毒显症病样,经酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、SDS-PAGE电泳、电子显微镜技术和RT-PCR技术鉴定,结果证明这7个分离物都与RSV江苏分离物在血清学上有近源关系(RSV-Js)。在电子显微镜下,病毒粒子的形状为3-10 nm宽、500-2000 nm长且极度卷曲的柔丝体,在低浓度和合适缓冲液环境下可展开。经SDS-PAGE电泳可见大小为35.5±0.5 kDa的蛋白带,系RSV核衣壳蛋白(核蛋白质或外壳蛋白)。同时,用纯化的RSV病毒免疫小鼠和家兔,制备了高特异性的抗血清,利用这些抗血清设计了双抗体夹心酶联免疫吸附检测RSV的试验方法。根据已知的RSV碱基序列,在大肠杆菌中表达了RSV浙江分离物的核衣壳蛋白;并利用RT-PCR技术成功克隆了RSV浙江分离物RNA1基因组,测定了整个RNA1全序列。RSV浙江分离物RNA1全序列包含8968个核苷(nt),且基因组结构与其他RSV分离物相似。RSV-Zj的RNA1也只包含了一个大的开放阅读体框(ORF),能编码一个含2919个氨基的酸pc1蛋白质,分子量大小预计为337kDa。序列分析表明它与其它4个分离物RNA1的结构相似,核苷酸同源性为92-97%,氨基酸同源性为97-99%;与同属的其它成员的对应蛋白相比,则同源性则较低,约在30-46%之间。结构域分析表明RSV pc1是蛋白酶家族的一个多蛋白(polyprotein)成员,它在表达后很可能通过自降解过程产生病毒RNA聚合酶和其它病毒蛋白质。
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