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背景与目的:肺癌是世界范围内主要的癌症死亡原因,其发病率和死亡率均呈明显增高的趋势。通常依据生物学行为的差异,在临床中将肺癌广泛的分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两大类,其中NSCLC占所有的肺癌病例的80%~85%。大多数NSCLC患者在就诊时肿瘤已经发生了局部进展或者远处转移,对于此类患者多采用化疗进行治疗,但是研究表明化疗并不能够改变大多数肺癌患者的远期治疗结局,在化疗上的获益程度已经最大化,也就是说,化疗的疗效已经达到了一个平台期。近年来,随着人们对肿瘤分子生物学和基因水平的认识不断深入,分子靶向治疗的研究和临床应用已成为了人们关注的热点之一。近期研究显示酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)与细胞毒药物不同的给药顺序会对抗肿瘤效果产生明确的影响,因此引起人们对于细胞毒药物与分子靶向药物最佳应用顺序的关注。西妥昔单抗联合化疗作为晚期NSCLC患者一线治疗的临床试验(FLEX)结果表明,在化疗的基础上联合西妥昔单抗较单用化疗能延长患者的总生存期(overall survival,OS)。在晚期NSCLC治疗领域,多项临床研究(E4599、AVAIL、SAIL等)证实,贝伐珠单抗联合化疗可延长晚期NSCLC患者的OS和无进展生存期(progression-free survival,PFS)。但是目前,关于西妥昔单抗、贝伐单抗与细胞毒药物给药顺序的研究较少。目前尚未见国内外有类似研究的报告。本课题为观察多西他赛、西妥昔单抗和贝伐单抗给药顺序的基础性研究,通过选取肺癌细胞株KRAS突变型A549和KRAS野生型H1299作为研究对象,分别以不同顺序给予多西他赛、西妥昔单抗和贝伐单抗,给药结束后检测细胞凋亡相关蛋白、细胞周期阻滞及凋亡情况,观察多西他赛联合西妥昔单抗序贯贝伐单抗与多西他赛联合贝伐单抗序贯西妥昔单抗对不同kras类型的肺癌细胞株的抗肿瘤效果,确定西妥昔单抗与贝伐单抗的最佳应用顺序,为临床合理用药提供理论依据。方法:选择kras突变型肺癌细胞株a549和野生型h1299细胞进行培养、传代,并按实验设计将细胞分为4组,即对照组、单药孵育组(txt、c225、bev)、两药联合孵育组(txt+bev、txt+c225)和两药联合孵育、单药序贯组(txt+c225→bev、txt+bev→c225),应用mtt法、流式细胞技术分别检测不同用药顺序对2种细胞存活率、细胞周期及细胞凋亡的影响,并用westernblot法测定细胞凋亡相关蛋白含量。结果:1.多西他赛、西妥昔单抗和贝伐单抗不同用药顺序对肺腺癌a549和h1299细胞生长均有一定的抑制作用。其中两药联合孵育、单药序贯组(txt+c225→bev、txt+bev→c225)对a549和h1299细胞生长的抑制作用较单药组和两药同时孵育组明显,但对a549和h1299细胞生长的影响不存在显著差异。2.多西他赛单药可对肺腺癌a549和h1299细胞产生明显的g2/m期阻滞作用;西妥昔单抗与贝伐单抗则可将细胞阻滞于g0/g1期;两药联合孵育组(txt+bev、txt+c225),g2/m期阻滞细胞较对照组增加;而两药联合孵育、单药序贯组(txt+c225→bev、txt+bev→c225)对细胞周期的阻滞作用与两药联合孵育组相比,未见明显改变且对2细胞株细胞周期的影响不存在显著差异。3.两药同时孵育、单药序贯组(txt+c225→bev、txt+bev→c225)对a549和h1299细胞凋亡的影响作用要优于单药组与两药联合孵育组,但二者之间不存在差异。4.多西他赛、西妥昔单抗和贝伐单抗不同应用时序作用于肺腺癌细胞株a549与h1299后,升高了bcl-2蛋白的表达,降低了bax蛋白的表达,bcl-2/bax的比值降低,说明多西他赛、西妥昔单抗和贝伐单抗不同应用时序均可通过调节细胞内bcl-2和bax的表达诱导细胞的凋亡。结论:多西他赛联合西妥昔单抗序贯贝伐单抗与多西他赛联合贝伐单抗序贯西妥昔单抗(TXT+C225→Bev、TXT+Bev→C225)对KRAS突变型肺癌细胞株A549和野生型H1299的生长情况、细胞凋亡以及细胞凋亡相关蛋白含量的影响均较明显,但对2细胞株的抗肿瘤效果不具有明显差异性。