3-苯氧基苯甲酸降解菌Sphingobium sp. BA3的分离鉴定、生物学特性及基因工程菌的构建

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从石油污染土壤中分离到1株能以3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)为唯一碳源生长的细菌BA3 (GenBank Accession No.GQ176409)。据其生理生化特征和16S rRNA基因序列序列相似性分析,将该菌鉴定为鞘脂菌属(Sphingobium sp.)。对BA3的生物学特性研究结果显示,该菌株在pH5.0-8.0范围内生长良好,在pH7.0生长最好,最适生长温度为30℃,装液量20mL时,生长量最大,随着装液量的增加生长呈下降趋势。在5-15mg·L-1的盐浓度范围生长较好,以葡萄糖为碳源,以有机氮为氮源的培养基中生长较好,对链霉素有抗性。该菌株在60h内对100mg L-1的3-苯氧基苯甲酸降解率达到99%。降解3-苯氧基苯甲酸的最适温度为30℃,pH值为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关。接种量大于3%时有较高降解效果。通过降解菌株BA3利用化合物的情况,发现能利用邻苯二酚、原儿茶酸、对苯二酚、和间苯二酚等,但不能利用苯酚、对硝基苯酚和2,4-二硝基苯酚。根据下载的1,2-双加氧酶基因的保守区设计引物,从3-PBA降解菌株BA3扩增到邻苯二酚1,2-加氧酶基因,得到400bp大小的片段,通过比对发现该序列与Sphingobium sp.YBL3和Sphingobium sp.YBL2的catA基因同源性最高,达到84%。拟除虫菊酯类杀虫剂pytH水解酶基因为研究发现的一个新的菊酯水解酶基因,过PCR从菊酯降解菌株JZ-2总DNA扩增了pytH,将pytH定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pPYTH,在辅助质粒pRK600的帮助下,三亲接合将pPYTH转移到3-PBA降解菌株Sphingobium sp.BA3中,得的工程菌Sphingobium sp.BA3-pytH可以快速降解菊酯类杀虫剂及其中间产物3-PBA; BA3-pytH对菊酯的降解效率较出发菌株JZ-2高。该基因工程菌应比野生菌株JZ-2在菊酯污染环境的生物修中具有优势。
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