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目的：探讨了外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA／c-Fos蛋白、c-jun mRNA／c-Jun蛋白、Caspase-3蛋白表达的影响。 方法：在微动脉夹夹闭两侧颈总动脉制作的大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型上，应用原位杂交方法和显微图象分析方法检测全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA、c-jun mRNA表达，应用免疫组织化学方法和显微图象分析方法检测全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-Fos蛋白、c-Jun蛋白，Caspase-3蛋白表达。 1．实验动物分组 采用健康雄性SD大鼠，体重300-350g，实验动物由中国医科大学实验动物中心提供。随机分组为(1)假手术组(2)缺血组：全脑缺血30 min后给予0.9％生理盐水1 ml，分别在3h、1d、3d不同时间段取材。(3)CGRP组：全脑缺血30 min后给予CGRP1 μg／1 ml，3h后取材。(4)NGF组：全脑缺血30 min后给予NGF1000 u／1 ml，3h后取材。(5)NGF&CGRP组：全脑缺血30 min后给予NGF1000 u+CGRP1 μg／1 ml，分别在3h、1d、3d不同时间段取材。每组动物各6只。 2．微动脉夹夹闭两侧颈总动脉制作大鼠全脑缺血后再灌注模型 大鼠水合氯醛腹腔麻醉(350mg／kg体重)，取颈部正中切口，钝性分离左、右颈总动脉及右颈外动脉，用微动脉夹夹闭两侧颈总动脉30min，并从右颈外动脉近心端插入套管针至颈内动脉与颈外动脉的分叉处备用。30 min后去除两侧颈总动脉上的微动脉夹开始再灌注并经套管向颈总动脉内注射药物，30 min内注射完后拔出套管并结扎右颈外动脉。假手术组不夹闭左右颈总动脉，不注射药物，其它同上。 原位杂交检测各组动物3h后取材。麻醉后开胸经左心室插管至升主动脉，肝素生理盐水冲洗干净血液，用4％多聚甲醛(含有1／1000DEPC)灌流固定，立即开颅取脑取两耳极连线前3mm左右的冠状切面组织块(含纹皮质)，4％多聚甲醛(含有1／1000DEPC)室温固定1 h，蒸馏水充分洗涤，30％蔗糖液4℃过夜沉底后，冠状切面冰冻切片，厚16 μm，4℃冰箱保存备用。 免疫组织化学检测各组动物分别在3h、ld、3d不同时间段取材。麻醉之后开胸经左心室插管至升主动脉，肝素生理盐水冲洗血液后，用4%多聚甲醛灌流固定，开颅取脑取两耳极连线前3 mm左右的冠状切面组织块(含纹皮质)，4%多聚甲醛固定24h，30%蔗糖液4℃过夜沉底后，冠状切面冰冻切片，厚12林m，4℃冰箱保存备用。结果 1 .C一fos mRNA原位杂交检测结果: 假手术组阳性反应非常弱，缺血组阳性反应强于假手术组(P<0.01)，阳性细胞数量多且多呈圆形、椭圆形，胞桨内可见浓染的棕褐色颗粒阳性反应。NGF组和CGRP组分别与缺血组比较阳性反应弱(P<0.05)。NGF&CGRP组与缺血组比较阳性细胞数量明显少，阳性反应明显弱(P<0.01)，NGF&CGRP组分别与NGF组和CGRP组比较阳性反应弱(P<0.05)。 2.。一Fos蛋白的免疫组织化学检测结果: 假手术组大鼠纹皮质未见C一Fos蛋白表达。缺血组较假手术组大鼠纹皮质。一Fos蛋白表达增加(p<0.01)，c一Fo。蛋白表达缺血后再灌住3h时强，ld、3d时弱。CG即组较缺血组C一Fos蛋白表达弱(p<0.05)。NGF组较缺血组。一Fos蛋白表达弱(p<0.05)。NGF&CGRP组较缺血组C-Fos蛋白表达明显弱(p<0.01)，NGF&CGRP组分别较CGRP组和NGF组C一Fos蛋白表达弱(p<0.05)，NGF&CGRP组。一Fos蛋白表达缺血后再灌注3h时强，ld、3d时弱。 3.c一jun mRNA原位杂交检测结果: 假手术组阳性反应非常弱，缺血组阳性反应强于假手术组(P<0.01)，阳性细胞数量多且多呈圆形、椭圆形，胞桨内可见浓染的棕褐色颗粒阳性反应。NGF组和CGRP组分别与缺血组比较阳性反应弱(P<0.05)。NGF&CGRP组与缺血组比较阳性细胞数量明显少，阳性反应明显弱(P<0.01)，NGF&CGRP组分别与NGF组和CGRP组比较阳性反应弱(P<0.05)。 4.。一Jun蛋白的免疫组织化学检测结果: 假手术组大鼠纹皮质未见C一Jun蛋白表达。缺血组较假手术组大鼠纹皮质c一Jun蛋白表达增加(p<0.01)，c一加n蛋白表达缺血后再灌注3h时强，ld、3d时弱。CGRP组较缺血组e一Jun蛋白表达弱(p<0.05)。NGF组较缺血组c一Jun蛋白表达弱(p<0.05)。NGF&CGRP组较缺血组C-Jun蛋白表达明显弱(p<0.01)，NGF&CGRP组分别较CGRP组和NGF组c一Jun蛋白表达弱(p<0.05)，NGF&CGRP组C一Jun蛋白表达缺血后再灌注3h时强，ld、3d时弱。 5.caspase一3蛋白的免疫组织化学检测结果:- 假手术组大鼠纹皮质未见CasPase一3蛋白表达，缺血组较假手术组Caspase一3蛋白表达增加(P<0.01)，CGRP组Caspase一3蛋白表达弱于缺血组(p<0.05)，NGF组Caspase一3蛋白表达弱于缺血组(P<0.05)，NGF&CGRp组easpase一3蛋白表达明显弱于缺血组(p<0.01)，分别弱于CG即组(P<0.05)和NGF组(P<0.05)。缺血组Caspase一3蛋白表达缺血后再灌注3h时表达，1d达高峰，3d时减弱，NGF&CGRP组Caspase一3蛋白表达随着缺血后再灌注时间的延长而减弱。结论 1.全脑缺血后再灌注大鼠脑组织纹皮质。一fos mRN灯。一Fos蛋白、“一jun mRN灯。一Jun蛋白、Caspase一3蛋白表达增强。 2.NGF抑制全脑缺血后?