香铃草子中巯基化合物对重金属胁迫应答变化的研究

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植物体内的巯基化合物是植物对外源性重金属的忍耐、积累以及解毒作用的重要因素,技与巯基可有效清除重金属胁迫导致胞内生成的过量活性氧自由基,以及巯基化合物与重金属生成无毒配合物并在胞内特定细胞器区域化积累有关。然而,巯基化合物在与重金属离子生成无奉配合物时,其配位点还不十分清楚,因巯基化合物还包含酰胺基、羧基、氨基等多个配位基团。当植物受到不同的外源性重金属胁迫时,胞内低分子量的巯基化合物和蛋白质巯基化合物分别是如何应答也尚不明确。所以探讨巯基化合物对重金属胁迫的应答变化,对植物修复重金属污染和重金属解毒具有实际意义。采用细胞破壁与衍生化为一体的样品提取方法,利用高效液相色谱法对不同植物样品提取液进行测定,筛选出了巯基含量丰富的香铃草子样品。香铃草子中GSH和总巯基(-SH)的含量为别为4.0682 μmol/g和6.0600 μmol/g,RSD为2.50%和1.17%,测定方法的回收率分别为100.43%和101.79%,其检测限分别为0.1593μmol/g和0.1854μmol/g。将香铃草子作为生物活细胞样品,采用高效液相色谱法测定了不同金属盐溶液浸泡香铃草子2 h后样品中GSH和总巯基(-SH)的含量变化,并利用ICP-MC测定了受到重金属应激处理后的香铃草子细胞内的重金属吸附量。结果表明:香铃草子对氧化性较强的Cu2+和Hg2+吸附量最大,分别为26.9347μmol/g和15.8815 μmol/g,RSD分别为1.41%和2.40%,并伴随游离巯基的耗尽,可能是巯基直接与Cu2+和Hg2+作用致使无法被检测到,同时还可能有一部分巯基化合物用于清除金属离子在细胞中代谢会释放出氧自由基而被消耗;胞内Pb2+的吸附量也比较大,为5.5021 μmol/g,RSD为1.49%,并且在Pb2+胁迫样品过程中刺激了细胞内Prot-SH的合成,增加了0.8142 μmol/g,可能是Pb2+与巯基化合物中其它配位基团结合,以降低胞内Pb2+的浓度起到解毒的作用:而Cd2+的吸附量却很低为0.0987 nmol/g.同时未引起巯基化合物含量发生明显的变化,该应答作用还有待进一步探究。本研究对进一步筛选富含巯基化合物的生物样品及进一步探讨巯基化合物对重金属解毒机制研究提供了重要的分析方法及基础数据。
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