目的:构建针对人LKB1(liver kinase B1,或STK11 serine/threonine protein kinase11)基因的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达的慢病毒载体,并观察转染人肝癌细胞Huh7后对LKB1 mRNA和蛋白的表达。方法:根据人LKB1的基因信息,设计3条针对LKB1基因cds区的si RNA序列,同时设计1条negative序列用于RNAi阴性对照(Negative Control,NC),组建与shRNA相对应的4对互补的单链DNA。将合成的序列插入空载体GV115(元件顺序为:hU6-MCS-CMV-EGFP)中,重组获得慢病毒载体。进行测序鉴定后,再转染293T细胞产生病毒液,得到的病毒液再转染肝癌细胞株Huh7。荧光显微镜观察转染后细胞的情况,实时荧光定量PCR检测转染后细胞LKB1 mRNA的表达情况,Western印迹法检测转染后细胞LKB1蛋白的表达情况。结果:成功构建含shRNA LKB1的慢病毒载体,人肝癌细胞株Huh7转染后LKB1mRNA和蛋白表达显著下调。结合感染后的细胞照片,判定shRNA LKB1-2(KD2)组为有效靶点组。结论:成功获得阻断人肝癌细胞株Huh7 LKB1表达的shRNA序列,并构建慢病毒载体,人肝癌细胞株Huh7转染后LKB1 mRNA和蛋白表达显著下调,为后期研究提供了实验基础。