论文部分内容阅读
第一章LB肉汤-腹膜透析外接硅胶管系统大肠杆菌生物膜模型的建立目的:利用LB肉汤-腹膜透析外接硅胶管系统建立大肠杆菌(E.coli)的体外细菌生物膜(bacterial biofilm,BBF)模型。方法:(1)利用刚果红琼脂平板初步判断E.coli形成BBF的能力;(2)利用腹膜透析外接硅胶管为载体,LB肉汤为培养液建立E.coli BBF体外模型。分别用银染法及扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)观察并鉴定菌株BBF。结果:(1)刚果红琼脂平板上的标准菌株ATCC25922菌落及周围琼脂变黑;(2)培养72小时后即肉眼可见腹透管表面覆盖有一层黄白色粘液膜样物质。银染后在普通光学显微镜下可观察到腹透管表面团块状或棉絮状黑色物质;扫描电子显微镜可见大肠杆菌呈簇、珊瑚状在腹透管表面聚集,细菌间有多量粘液样物质粘连成膜样物,形成具有三维立体结构的BBF,且膜样物质厚薄不均。结论:(1)本课题组的实验菌株ATCC25922具有形成BBF的能力;(2)LB肉汤-腹透管系统培养72小时可形成早期大肠杆菌体外生物被膜模型。第二章苦参碱对已形成的大肠杆菌生物被膜破坏作用研究目的:研究苦参碱标准品(matrine)对腹膜透析外接硅胶管表面E.coli BBF形成的破坏作用。方法:利用完全随机对照设计的方法,测出苦参碱及左氧氟沙星对E.coli的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory,MIC),取1厘米长腹膜透析外接硅胶管,构建E.coliBBF模型。将模型随机分为数量相同的两组,分别在3天和7天时加入药物干预。各组内再随机分成4组,分别为A组:空白对照组,B组:MIC左氧氟沙星组(阳性对照),C组:MIC苦参碱组,D组:2 MIC苦参碱组,E组:4 MIC苦参碱组。每组均分为0小时,4小时,8小时,24小时4个观察时间,于每个时间取出相应数目的载体,用生理盐水漂洗掉残留的药物和浮游菌,分别行连续稀释法细菌菌落计数、结晶紫染色半定量、银染法、扫描电子显微镜观察E.coliBBF的形成情况。结果:(1)苦参碱的MIC为4.096mg/ml,左氧氟沙星的MIC为0.03125ug/ml;(2)早期BBF(3天):活菌计数:MIC左氧氟沙星组、MIC苦参碱组、2MIC苦参碱、4MIC苦参碱与空白对照相比菌落减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结晶紫染色:MIC左氧氟沙星组、MIC苦参碱组、2MIC苦参碱、4MIC苦参碱与空白对照相比数量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。银染:普通光学显微镜下可见空白对照组E.coliBBF呈大片黑褐色棉絮样生长,用药物干预的MIC左氧氟沙星组、MIC苦参碱组、2MIC苦参碱组、4MIC苦参碱组BBF较空白组黑褐色棉絮样物质减少。SEM:扫描电镜下可见空白对照组有稠厚堆积的BBF,而MIC左氧氟沙星组、MIC苦参碱组生物膜形成较空白组减少,2MIC苦参碱、4MIC苦参碱几乎不形成BBF,仅可见分散的单个菌体。成熟BBF(7天)结果与早期BBF相似。结论:MIC、2MIC、4MIC苦参碱对早期及成熟大肠杆菌BBF有一定的破坏作用。