基于RhlI/R和LuxI/R群体效应的细胞共生系统构建

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共生关系在医药,能源,环境等各个领域中广泛存在并具有很好的应用价值。为了研究抗生素胁迫条件下共生系统中细胞群体效应及系统稳定性,本文从数学模型模拟和实验两方面入手,运用合成生物学的研究手段和方法,构建了基于群体效应信号分子的,对氨苄青霉素和卡那霉素胁迫响应的大肠杆菌DH5α双菌株(ER和EG)人工共生体系,获得以下主要结果: (1)首先设计基于Rhll/R和Luxl/R的群体效应人工共生系统;数学模型研究表明,过低的细胞初始浓度会导致此共生系统面临崩溃;不同的氨苄青霉素和卡那霉素浓度下,共生关系对两种细胞存活的贡献度有所不同,两种细胞对抗生素环境的耐受力不同导致群体比例存在差异。 (2)运用分子生物学的手段实现了ER和EG细胞共生相关功能基因的组装;采用LC-MS-MS和GC-TOF-MS方法,确定ER细胞能够产生3OC6HSL信号分子,EG细胞能够产生C4HSL信号分子;进一步研究表明ER细胞能感应CHSL信号分子并能在高卡那霉素浓度(1mg/ml)的培养基中生长,EG细胞能够感知30C6HSL信号分子并能在高氨苄青霉素浓度(5mg/ml)的培养基中生长。 (3)进一步实验研究表明,在ER和EG细胞组成的共生体系中,在高氨苄青霉素(4mg/ml)和卡那霉素(0.4mg/ml)条件下,ER和EG细胞延迟期增长,但ER细胞比EG细胞更具竞争优势;细胞初始浓度固定时,随着氨苄青霉素和卡那霉素浓度的增高共生系统稳定性降低,过高的浓度会导致此共生系统崩溃。当氨苄青霉素浓度为4mg/ml,卡那霉素浓度为0.4mg/ml时,ER和EG细胞最低初始浓度在2×106cells/ml左右就可维持此共生系统。
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