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目的:通过体外实验研究双氢杨梅素皮素（Ampelopsin，APS）及其与β-内酰胺类抗生素联合用药对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)的抑杀作用。通过体内实验研究APS对MRSA致死及亚致死菌血症模型小鼠的保护作用。最后采用热灭活MRSA感染RAW264.7巨噬细胞研究APS抗MRSA感染作用的机制研究，及其作用机制是否与激动TLR2信号通路有关。 方法: 1.体外抗菌实验:采用96孔板培养菌液，吸光度法检测在不同的培养时间菌液的OD600，平板菌落计数法得出菌浓度，然后绘制MRSA生长曲线;用肉汤二倍稀释法测定APS及其与β-内酰胺类抗生素联合用药对MRSA的最小抑菌浓度(MIC);采用棋盘法测定APS及其与β-内酰胺类抗生素联合用药对MRSA的部分杀菌浓度(FICI);采用96孔板和平板菌落计数法测定APS对MRSA菌液作用不同时间时的杀菌曲线。 2.体内抗菌实验:采用尾静脉注射法构建MRSA致死和亚致死菌血症小鼠模型;正交试验法优化构建MRSA致死菌血症小鼠模型条件，在此模型基础上检测APS对其生存率的影响;平板菌落计数法检测血内细菌数，动物血常规分析法检测白细胞(WBC)、中性粒细胞及其百分比(NEUT、NEUT％)、单核巨噬细胞及其百分比(MONO、MONO％)、嗜酸性巨噬细胞(EO)、淋巴细胞(LYMPH)、嗜碱性巨噬细胞及其百分比(BASO、 BASO％)、血小板(PLT)的变化、脏器指数法检测小鼠脾、肾、肺、肝脏与体重比值，通过上述方法检测的指标评价APS对MRSA亚致死菌血症小鼠的保护作用;采用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中TNF-α、IL-10、IL-6、IL-1β炎症因子含量的变化。 3.机制研究:采用MTT法确定APS对于RAW264.7巨噬细胞的最适作用浓度范围及作用时间;继而用热灭活MRSA处理RAW264.7细胞，收集培养细胞上清，采用ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-6水平，同时收集细胞提取总RNA，采用RT-PCR法检测TLR2、MYD88、JNK1、P38和NF-κBmRNA表达来探讨APS抗MRSA菌血症作用机制。 结果: 1.体外抗菌实验:(1)吸光度-时间(OD600-T)曲线得出MRSA在4h～5h之间OD达到0.7～0.8，从吸光度-浓度(OD600-CFU)曲线得出OD在0.7～0.8时，细菌浓度(CFU)为5×1011～8×1012，此时细菌活力最强。(2)肉汤二倍稀释法实验结果:单用APS、泰能、头孢西丁钠、苯唑西林、青霉素G对MRSA的MIC分别为250、200、400、800、125μg/mL，MBC分别为500、800、1600、1600、500μg/mL。(3)棋盘法结果:APS的最小有效抗菌浓度为62.5μg/mL，分别使得泰能、头孢西丁钠、苯唑西林和青霉素G对MRSA的MIC降低为各药物单用MIC时的1/2、1/4、7/19和1/2。 APS与泰能、头孢西丁钠、苯唑西林和青霉素G联合应用的FICI的值分别为0.667、0.667、0.8125和0.639，表现为抗菌作用相加。(4)APS杀菌曲线得出，2MIC和4MIC的APS在10h时杀菌率达到100％，1MIC的APS在10h时的抑菌率为50％左右。说明APS在低浓度时具有抑菌作用，而在高浓度时具有杀菌作用。 2.体内抗菌实验:(1)正交试验结果表明在37℃培养MRSA至第二代，以5×1011 CFU/mL菌液浓度、每只小鼠尾静脉注射0.2mL能成功复制菌血症小鼠模型;以1×1011 CFU/mL菌液浓度、每只小鼠尾静脉注射0.2mL能成功复制亚致死菌血症小鼠模型。(2)平板菌落计数法结果表明，与空白组比较，4h、24h、48h、72h和7d时的模型组细菌数显著升高(P＜0.01)，24h达峰值，达到6.7×105/mL，之后呈时间渐进性减少;与模型组比较，APS高、低剂量显著降低细菌数(P＜0.01)。(3) ELISA法结果显示，与空白组比较，在不同时间点模型组小鼠血清中的TNF-α、IL-10、IL-6、IL-1β含量均显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，4h时APS高剂量显著降低TNF-α水平(p＜0.01);24h时APS高、低剂量显著性降低IL-1β水平(p＜0.01～0.05)和IL-6水平(p＜0.01);48h时APS高、低剂量能显著降低IL-6水平(p＜0.01～0.05);48h时APS高剂量显著性升高IL-10水平(p＜0.01)。(4)脏器指数法结果显示，与空白组比较，模型组在4h时的肝、脾脏指数有差异(p＜0.05);24h和48h时的肾、肝、脾、肺脏指数有差异(p＜0.01～0.05);72h和第7d时，脾脏指数有差异(p＜0.05)。与模型组比较，4h时给药组无差异;24h时APS高、低剂量组的肾脏指数有显著性降低(p＜0.01～0.05);48h时APS高剂量组的肾、脾脏指数有降低(p＜0.05);72h和第7d时APS高、低剂量组的脾脏指数有显著性降低(p＜0.01～0.05)。(5)动物血常规结果显示，与空白组比较，在不同时间点模型组的WBC、NEUT、NEUT％、MONO、MONO％、EO、LYMPH、BASO、BASO％、PLT有差异(p＜0.01～0.05);与模型组比较，在72h时APS高剂量组的WBC、PLT、LYMPH、NEUT、MONO有显著性升高差异(p＜0.01)，EO％、BASO％显著性降低(p＜0.01)，APS低剂量组的WBC、LYMPH有升高(p＜0.05)，BASO％显著性降低(p＜0.01)。 3.机制研究:(1) MTT法实验结果显示，APS在浓度范围为15.625～7.8125μg/mL，作用24h时能显著性促进RAW264.7巨噬细胞的增殖。(2)ELISA法结果显示，热灭活MRSA菌可明显的诱导RAW264.7细胞TNF-α和IL-6的分泌，终浓度为15.625、7.8125μg/mL的APS对TNF-α抑制率分别为32.9％和16.0％(P＜0.01～0.05);终浓度为15.625、7.8125μg/mL的APS对IL-6分泌的抑制率分别为35.1％和23.0％(P＜0.01)。(3) RT-PCR结果显示，热灭活MRSA菌可诱导RAW264.7细胞的TLR2、MYD88、NF-κBmRNA表达升高(P＜0.05)，而对JNK1、P38mRNA无影响;单用APS对RAW264.7细胞的TLR2、MYD88、NF-κB mRNA、JNK1、P38mRNA无影响;但其可显著性降低热灭活MRSA对RAW264.7细胞的TLR2、MYD88、NF-κB mRNA表达(P＜0.01)，对JNK1、P38mRNA无影响。 结论:本课题通过实验研究表明，在体外APS能抑杀MRSA。在体内APS防治MRSA菌血症感染可能的作用机制是通过调控TLR2信号通路上TLR2、MYD88、NF-κBmRNA及TNF-α、IL-6、IL-10、IL-1β免疫细胞因子的表达，调节机体中的白细胞（EO、BASO、MONO、LYMPH和NEUT）、RBC、PLT和PCT等细胞数量，从而增强机体免疫应答功能，提高机体对细菌的清除及抑杀能力，达到对抗MRSA菌血症的目的。