不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞LEP503基因检测及分析

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目的:白内障是国内外第一位致盲性眼病,因其发病机制复杂,至今尚未明确。近年来研究表明基因表达异常与白内障的发生密切相关。晶状体上皮细胞特异性基因表达可能对于晶状体上皮细胞的生长、分化或细胞损伤修复这些特殊过程起了关键的作用。1995年~2001年Yi Wen教授发现一种晶状体上皮细胞特异表达的基因LEP503 (lens epithelium gene product 503, LEP503)。研究表明LEP503在正常人晶状体和培养的晶状体上皮细胞系中表达,并且与分化有关,然而LEP503在白内障患者中是否表达以及是否与增殖有关,目前还未有报道。本实验旨在研究LEP503在不同年龄白内障患者以及正常人晶状体中表达情况,探讨白内障发生机制。方法:收集2003年3月~6月不同年龄白内障患者术中取下的晶状体前囊膜,年龄从7~90岁不等;2003年~2004年无白内障发生的尸体眼的晶状体前囊膜,年龄从10~91岁不等。从中选出50岁以下白内障患者10例(设为白内障中青年组)、50岁以上白内障患者10例(设为白内障老年组)、无白内障的正常人15例(设为正常对照组)。各组标本均男女混合,比例均为1:1,以排除性别差异影响。通过RT-PCR和Western-Blotting技术检测各组LEP503基因和蛋白表达情况,凝胶成像分析系统测定电泳条带密度值(根据IOD密度值和Marker含量换算出样品的DNA含量,再与内参基因β-actin的DNA含量相比,进行标<WP=5>准化),来比较各组之间LEP503表达的差异。利用SPSS12软件包,t检验和线性回归进行统计学分析。结果:1.RT-PCR和凝胶成像分析结果显示:正常对照组和白内障组年龄指标均衡,可比性好,其中白内障组LEP503基因表达比正常对照组高,两者比较有显著性差异P<0.01;白内障中青年组和老年组之间LEP503基因表达有显著性差异P<0.01;而正常人中青年和老年之间LEP503基因表达无显著性差异,P=0.75;白内障患者LEP503表达量与年龄之间呈明显的线性关系,P<0.01,其随着年龄的增加表达增高。2.Western-Blotting结果显示:白内障患者LEP503蛋白表达量明显比正常人高,且年龄越大LEP503蛋白表达越强,与RT-PCR结论一致,而正常人LEP503蛋白表达未见明显规律。结论:1. LEP503基因在白内障患者中有表达且比正常人高;2. 白内障患者LEP503基因的表达量与患者年龄之间呈线性关系。3. LEP503基因与晶状体上皮细胞增殖没有直接关系;4. LEP503基因可能参与了老年人白内障和中青年人白内障不同发病机制过程。
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