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天然双特异性抗体(Natural bispecific antibody, nBsAb)是近年来出现的一个全新抗体概念,其主要特点是具有两个不同的抗原结合位点(Antigen-binding sites)且能在机体内自然产生。随着国内外相关研究的陆续开展,已发现这种天然双特异抗体可产生于长期接受不同抗原免疫或脱敏治疗的机体体内,还可天然存在于某些人类疾病中。然而除自身免疫性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)外,人类疾病中天然双特异抗体研究并不多见,且鲜有研究探讨其存在的病理生理意义。桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis, HT)是一种常见的甲状腺自身免疫性疾病,甲状腺特异自身抗体的出现是其主要特点。考虑到这种疾病发展缓慢,病程较长,存在持续高滴度的抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-thyroglobulin antibody, Anti-Tg)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-thyroid peroxidase antibody, Anti-TPO),且有亚型研究发现IgG4是抗Tg抗体和抗TPO抗体的一个优势亚型,我们认为桥本甲状腺炎基本符合天然双特异性抗体产生条件,是天然双特异性抗体研究的良好疾病模型。本研究的目的是建立一种用于抗TPO/Tg天然双特异性抗体检测的双抗原夹心酶联免疫方法,检测桥本甲状腺炎患者血清中是否存在抗TPO/Tg天然双特异性抗体,在此基础上分析抗TPO/Tg天然双特异性抗体与患者临床、实验室指标间的关系,初步探讨其临床意义。我们首先以Tg蛋白为包被抗原,HRP标记的TPO蛋白为检测抗原,建立用于抗TPO/Tg天然双特异性抗体检测的双抗原夹心酶联免疫吸附试验,并对该体系进行全面的优化和验证分析。利用建立的这种双特异性抗体检测方法对136名HT患者血清、92例其他甲状腺疾病对照血清以及99例健康人血清抗TPO/Tg天然双特异性抗体水平进行测定,结果显示HT患者具有很高的抗TPO/Tg天然双特异性抗体阳性率(44.9%,61/136),显著高于疾病对照组(2.2%,2/92)(p<0.0001)和健康对照组(0%,0/99)(p<0.0001)。随后,我们通过竞争抑制试验排除了抗TPO与抗Tg单特异抗体间交叉反应造成的抗TPO/Tg天然双特异性抗体假阳性,血清RF检测排除了RF对检测的干扰,尺寸排阻色谱排除了抗体多聚物导致的检测假阳性,全面证实抗TPO/Tg天然双特异性抗体存在的真实性。我们还展开了一系列机制研究,实验结果显示磁珠法鉴定抗TPO/Tg天然双特异性抗体的亚型为IgG4型；体外半分子交换必须在还原环境下(GSH)进行,但血清抗TPO/Tg天然双特异性抗体水平与血清GSH及总抗氧化能力间未见统计学相关；抗TPO/Tg天然双特异性抗体与血清总IgG4水平之间存在负相关。本研究最大的一个亮点在于我们还进一步分析抗TPO/Tg天然双特异性抗体与患者临床、实验室指标间的关系,首次探讨天然双特异性抗体的临床意义。我们发现抗TPO/Tg天然双特异性抗体阳性组患者的炎症性指标hsCRP和TNFa较抗TPO/Tg天然双特异性抗体阴性组患者低(p<0.05),其他炎性因子SAA和IFNy也表现出了相同的组间趋势,提示抗TPO/Tg天然双特异性抗体可能具有抗炎的保护性作用。我们首次成功地在HT患者血清中检测出了一种天然的抗TPO/Tg天然双特异自身抗体,进一步丰富了天然双特异抗体在人类疾病中的研究,首次通过分析天然双特异抗体与炎性指标之间的关系,对其临床意义进行了初步探讨,结果显示这种抗TPO/Tg双特异自身抗体可能对机体具有保护作用,该发现对进一步研究此类抗体在疾病中的意义奠定了基础。