鞘蕊苏芳樟醇合成酶基因克隆与其花粉活力测定

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鞘蕊苏药材为唇形科植物毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii(Wild)Briq)的干燥全草,主产于印度、斯里兰卡等热带地区,我国云南、福建等省亦有少量分布,被植物学家界定为稀有物种。民间将鞘蕊苏用于治疗哮喘、肿瘤等疾患,疗效显著,称为“神药”。因此湖北福人药业公司将其开发为“鞘蕊苏胶囊”中药新品种。为解决鞘蕊苏胶囊产业化所需原料药材供求问题,湖北福人药业公司与本实验室产学研结合将其从云南移植湖北通城县种植。芳樟醇为鞘蕊苏有效成分,本论文对其合成酶基因进行了调控研究,并对鞘蕊苏花粉形态及其活力测定进行了较系统的生药学研究,从而为该药材规范化种植和培育优良种质提供了科学实验依据。采用通城县种植鞘蕊苏为研究对象,提取总RNA,构建芳樟醇合成酶基因模板,并以一代测序所得基因片段设计扩增引物,通过RACE分子生物学技术分析研究获得鞘蕊苏芳樟醇合成酶基因全长。研究结果表明,鞘蕊苏芳樟醇合成酶基因全长为1791bp,氨基酸数目为597个,属于异戊二烯家族。以芳樟醇合成酶基因全长设计引物,并加入HindⅢ和SalⅠ酶切位点,采用PCR技术将扩增产物连接Pet28a载体,构建重组表达载体,再将重组表达载体转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)之中,利用IPTG诱导后获得目的蛋白,与预测蛋白分子量68KDa一致,最后通过蛋白提纯试剂盒提取纯化目的蛋白。本项研究为芳樟醇合成酶基因调控进一步深入研究奠定了良好基础。采用现代生药学研究技术,对鞘蕊苏药材花粉的形态结构、生长条件及花粉活力等生药学特性进行了较系统研究。研究结果表明,鞘蕊苏花粉较其他唇形科植物具有其特征性,可作为鉴定该中药材的依据;花粉活力受气候、土质、PH值等因素影响,调节生态条件可提高种植鞘蕊苏的存活率。因此本项研究为通城规范化种植鞘蕊苏药材提供了科学实验依据。
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