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目的旨在研究Toll样受体4（TLR4）在铜绿假单胞菌（pseudomonase aeruginosa,PA）上清液诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用。为PA感染与巨噬细胞之间的作用机制研究提供重要依据,为研制针对PA感染的临床治疗及解决日益严峻的PA多重耐药问题提供新思路。方法首先用MTT法检测细胞增殖抑制率,筛选出PA作用的适宜浓度和作用时间,然后将RAW264.7巨噬细胞分为con组,MOD组,con+TAK242（TLR4抑制剂）组,MOD+TAK-242组,con组细胞不做任何处理,用按比例配置的培养基培养,MOD组细胞分别用含体积分数为0.10、0.20、0.30浓度的PA上清液与按比例配置的培养基的混合液培养,con+TAK-242组及MOD+TAK-242组分别为在不做任何处理的细胞及含体积分数为0.10、0.20、0.30浓度的PA上清夜处理的细胞中加入20μmol·L-1的TAK-242培养。将各组细胞培养4.5h,9h,18h后,分别用MTT检测各组细胞增殖抑制率,将各组细胞培养9h后,采用Hoechst染色法观察细胞凋亡后细胞核形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测TLR4蛋白的表达。结果1、Hoechst染色结果显示,con组部分细胞出现凋亡,可见凋亡细胞的核染色质固缩,边缘化,裂解成大小不一、形态不规则、深染的致密团块,可呈颗粒状或碎块状荧光,出现凋亡小体,MOD组的凋亡细胞核染色质也出现了细胞凋亡的形态学改变,经0.30浓度的PA上清液处理的细胞凋亡形态学改变最明显。2、MTT结果显示,当各组细胞培养时间及加入PA上清液浓度相同时,加入TAK-242后,细胞增殖抑制率减少,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。当各组细胞加入的PA上清液浓度相同,随着培养时间（4.5h,9h,18h）成比例增加,细胞的增殖抑制率不同程度逐渐增加,各组间比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）;当各组细胞培养的时间相同,随着PA上清液浓度（0.10,0.20,0.30）成比例增加,细胞增殖抑制率不同程度逐渐增加,各组间比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。3、流式细胞术结果显示,与con组相比,MOD组呈现不同程度的细胞凋亡（P<0.05）,且随着PA上清液浓度的逐渐增加,细胞凋亡率不同程度逐渐增加（P<0.05）;加入TLR4阻断剂后,与con组相比,细胞凋亡率降低（P<0.05）,与MOD组相比,细胞凋亡率降低（P<0.05）。4、Western Blot结果显示,与con组相比,MOD组TLR4蛋白表达增加（P<0.05）,且随着PA上清液浓度逐渐增加,TLR4蛋白的表达不同程度逐渐增加（P<0.05）;加入TLR4阻断剂后,与con组相比,TLR4蛋白的表达水平降低（P<0.05）。与MOD组相比,TLR4蛋白的表达水平降低（P<0.05）。结论1、PA上清液能够诱导巨噬细胞凋亡,且具有时间及浓度依赖性。2、PA上清液可以诱导TLR4表达,同时促进巨噬细胞的凋亡。然而加入TLR4阻断剂能够明显抑制TLR4的表达和巨噬细胞凋亡,可见TLR4在PA上清液诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡中具有促进作用。