第一部分:乳腺导管内注射MNU诱导大鼠乳腺癌发生及肿瘤生物学行为的研究背景:N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）作为强致癌剂用于构建化学诱导的大鼠乳腺癌模型。过去几十年传统的给药方式通过腹腔和尾静脉注射MNU,这种方式虽易于操作,但在实际研究中存在不足:乳腺肿瘤随机出现在大鼠6对乳腺中且数目不定,乳腺导管内注射通过乳腺天然管道递送MNU进行局部精准给药,因此模型构建上存在改进空间。若将MNU经乳腺导管内注射至大鼠乳腺,理论上能构建一个改进的大鼠乳腺癌动物模型。方法:实验一将12只4周龄雌性SD大鼠随机分为2组,实验组进行单次第4对乳腺导管内注射MNU（腹腔注射的同等剂量50mg/kg）,对照组注射MNU工作液的溶剂。造模成功后进行实验二,将30只4周龄雌性SD大鼠随机分为5组,溶剂对照组、MNU梯度剂量组（0.5,1.0和2.0 mg）和腹腔注射组。综合比较3组梯度剂量组的成瘤潜伏期、原位成瘤情况与肿瘤生长速度,选择合适的导管内注射MNU剂量,同时与腹腔注射MNU组的成瘤率、组织学和免疫组化ER、HER2与Ki-67的表达进行比较,实验终点时评估远处器官转移情况。结果:实验一乳腺导管内注射MNU全部出现肿瘤,第4对乳腺以外的腺体同时发生肿瘤。实验二的梯度剂量组（0.5,1.0和2.0 mg）中平均潜伏期分别为55.3、43.7和44.2天,对照组体重相比三组梯度剂量组有增高趋势,梯度剂量组中MNU1.0mg与2.0mg组相比0.5mg组肿瘤体积增长速度更快。根据单因素方差分析,1.0mg与2.0mg组肿瘤体积的增长相较于0.5mg组更快,差异具有统计学意义（p<0.05）。三组潜伏期和体重变化差异无统计学意义（p>0.05）。梯度剂量组与腹腔注射MNU组相比,大鼠成瘤率无差别。但基于受致癌因素暴露的乳腺个数的腺体成瘤率显著升高,差异具有统计学意义（p<0.01）。组织学类型结果表明梯度剂量组诱导的肿瘤均为恶性,且以乳头状癌和筛状癌为主,腹腔注射组出现了导管内乳头状瘤和纤维腺瘤等良性肿瘤。免疫组化染色结果提示导管内注射MNU1.0mg组与腹腔注射MNU组ER表达均为阳性且前者阳性比例更高,HER2表达均呈阴性,Ki-67均呈低表达且两组相当。所有大鼠均未见器官转移。结论:乳腺导管内注射MNU构建大鼠乳腺癌模型的方法证实可行。并且与腹腔注射MNU相比,导管内单次注射MNU1.0mg以更小的剂量诱导成瘤率相当且位置固定的大鼠乳腺肿瘤,肿瘤病理类型中以乳头状癌和筛状癌为主,恶性肿瘤的比例更高,特殊类型乳腺癌占比较大,提示预后较好。第二部分:乳腺导管内应用白蛋白紫杉醇早期干预时间及效果的研究背景:第一部分我们研究了将MNU经乳腺导管内注射构建模型的可行性,但是此改进模型对抗肿瘤药物的反应性还未进行相关验证。白蛋白结合型紫杉醇是溶剂型紫杉醇的改良制剂,增强了抗肿瘤效果同时避免了威胁生命的过敏反应。目前关于白蛋白紫杉醇治疗ER阳性早期乳腺癌的临床研究显示治疗效果同样显著。但由于紫杉醇有效浓度的提高,3-4级不良反应依旧频发,因此导管内应用白蛋白紫杉醇有望达到治疗效果的同时减小剂量,减轻全身不良反应。方法:实验一将15只4周龄雌性SD大鼠随机分为5组,在第4对乳腺导管内单次注射MNU1.0mg,自注射后第3-7周,于每周固定时间解剖出一组大鼠的乳腺制作切片观察导管上皮增生至恶变的状态。确定导管上皮细胞恶变开始时间后,实验二将18只4周龄雌性SD大鼠随机分为3组,在第4对乳腺导管内单次注射MNU1.0mg,早期恶变出现时进行白蛋白紫杉醇的尾静脉与导管内干预,比较不同给药方式对肿瘤生长速度、体重变化、总生存期的差异、组织学形态和细胞增殖以及凋亡相关指标的影响,同时观察给药后大鼠精神状态、血常规和生化指标的改变。实验终点评估远处器官转移情况。结果:实验一每周获取的大鼠乳腺通过HE染色和免疫组化（α-SMA与Calponin）染色共同判定出大鼠乳腺经过导管内注射MNU后可在第5-6周形成早期导管原位癌。药物干预实验中在第40天进行尾静脉或乳腺导管内给药,导管内注射白蛋白紫杉醇组相比于对照组和尾静脉注射组,荧光TUNEL和Caspase-3免疫荧光染色结果显示荧光强度更高,差异具有统计学意义（p<0.01）.Western blot结果Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax显示凋亡率更高,肿瘤增殖指标Ki-67表达百分比明显下降,差异具有统计学意义（p<0.05）。白蛋白紫杉醇给药后1周内,静脉组发生了不同程度的毛发脱落和活动减少,余2组未出现此现象。三组大鼠均未见远处器官转移。结论:导管内注射MNU1.0mg诱导的大鼠乳腺癌模型,导管上皮细胞恶变的开始时间为干预后第5-6周,MNU诱导的大鼠乳腺癌模型早期进行化学干预可达到更好的预防和治疗效果,导管内应用白蛋白紫杉醇相比静脉给药有着更优的疗效,同时副作用更小。