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动脉粥样硬化(AS)是一种由脂质和复合糖沉积在动脉壁而引起的动脉弹性降低、管腔变窄的病变,严重影响现代人的健康和生活。原花青素(PC)是一种具有抗氧化作用的天然活性物质,国内外研究表明PC可有效缓解高脂血症及AS。蔷薇红景天是中国特有的珍贵药用植物,其根茎富含原花青素。课题组前期对产地源于张家口崇礼县的蔷薇红景天原花青素(OPCRR)的提取工艺及其抗氧化活性等方面的进行了研究。在此基础之上,本论文研究了OPCRR对AS的干预作用及其机制,为今后预防和研究AS提供科学依据。本试验主要研究内容如下:
1.OPCRR对AS的干预作用及其干预途径。采用维生素D3辅助高脂乳剂灌胃的方法建立大鼠AS模型,同时三种剂量的OPCRR和姜黄素进行干预,连续灌胃8周。结果显示,阴性对照组大鼠动脉壁的各层结构均正常,AS模型对照组各层结构排列紊乱,有较多的脂质沉积,内膜增厚。与AS模型对照组比较,OPCRR可以显著降低大鼠血清中TC、TG、LDL-c和VLDL-c水平,显著提高HDL-c水平,并降低大鼠AI数值(P<0.05);在氧化应激方面,中、高剂量的OPCRR可以显著提高血清中SOD和GSH-Px活性,降低MDA的含量(P<0.05或P<0.01),且效果与姜黄素相似;中、高剂量的OPCRR可显著降低血清中的IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、ICAM-1和VCAM等细胞炎症因子的水平(P<0.05或P<0.01);中剂量的OPCRR可显著降低血清NO和ET-1的含量,降低NOS和iNOS的活性,提高eNOS的活性;此外,OPCRR可显著减少肝脏中的炎性灶和细胞变性,减少肝细胞的受损程度,同时还可以改善肝组织中脂质代谢、氧化应激和细胞炎性因子水平(P<0.05或P<0.01)。
2.OPCRR干预H2O2损伤HUVEC及相关信号通路的研究。培养人脐静脉血管内皮细胞,用H2O2进行造模,细胞增殖实验确定干预方法,最终观察细胞形态,测定细胞活性、NOS活性,以及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达情况。最终确定,H2O2造模浓度为0.2mmol/L时,OPCRR干预浓度为4000、2000和1000mg/L,干预时间为12h;低剂量OPCRR对H2O2损伤细胞无显著性影响,中、高剂量的OPCRR均具有极显著差异(P<0.01);OPCRR显著提高了NOS的活性,降低了iNOS的活性(P<0.05或P<0.01);并显著上调了PI3K、Akt和eNOS的表达量(P<0.01)。
结论:
采用动物试验和细胞试验方法,证明OPCRR可以改善AS大鼠血清和肝脏中脂质代谢、氧化应激和炎症反应等生化指标,并可以起到对动脉组织和肝脏组织的保护作用,经过初步机制研究,发现OPCRR主要通过调节PI3K/Akt通路中PI3K、Akt和下游的eNOS对AS进行调控。
1.OPCRR对AS的干预作用及其干预途径。采用维生素D3辅助高脂乳剂灌胃的方法建立大鼠AS模型,同时三种剂量的OPCRR和姜黄素进行干预,连续灌胃8周。结果显示,阴性对照组大鼠动脉壁的各层结构均正常,AS模型对照组各层结构排列紊乱,有较多的脂质沉积,内膜增厚。与AS模型对照组比较,OPCRR可以显著降低大鼠血清中TC、TG、LDL-c和VLDL-c水平,显著提高HDL-c水平,并降低大鼠AI数值(P<0.05);在氧化应激方面,中、高剂量的OPCRR可以显著提高血清中SOD和GSH-Px活性,降低MDA的含量(P<0.05或P<0.01),且效果与姜黄素相似;中、高剂量的OPCRR可显著降低血清中的IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、ICAM-1和VCAM等细胞炎症因子的水平(P<0.05或P<0.01);中剂量的OPCRR可显著降低血清NO和ET-1的含量,降低NOS和iNOS的活性,提高eNOS的活性;此外,OPCRR可显著减少肝脏中的炎性灶和细胞变性,减少肝细胞的受损程度,同时还可以改善肝组织中脂质代谢、氧化应激和细胞炎性因子水平(P<0.05或P<0.01)。
2.OPCRR干预H2O2损伤HUVEC及相关信号通路的研究。培养人脐静脉血管内皮细胞,用H2O2进行造模,细胞增殖实验确定干预方法,最终观察细胞形态,测定细胞活性、NOS活性,以及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达情况。最终确定,H2O2造模浓度为0.2mmol/L时,OPCRR干预浓度为4000、2000和1000mg/L,干预时间为12h;低剂量OPCRR对H2O2损伤细胞无显著性影响,中、高剂量的OPCRR均具有极显著差异(P<0.01);OPCRR显著提高了NOS的活性,降低了iNOS的活性(P<0.05或P<0.01);并显著上调了PI3K、Akt和eNOS的表达量(P<0.01)。
结论:
采用动物试验和细胞试验方法,证明OPCRR可以改善AS大鼠血清和肝脏中脂质代谢、氧化应激和炎症反应等生化指标,并可以起到对动脉组织和肝脏组织的保护作用,经过初步机制研究,发现OPCRR主要通过调节PI3K/Akt通路中PI3K、Akt和下游的eNOS对AS进行调控。