珙桐组织培养与植株再生体系的建立

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珙桐(Davidia involucrata Baill.)为我国特有的珙桐科单种属植物,是第三纪古热带植物区系的孑遗种,由于其头状花序基部有两枚白色大苞片,如白鸽展翅,故被称为“中国鸽子树”。近年来,由于自然和人为的原因,珙桐的天然分布面积和天然种群数量急剧下降,现天然分布种群已濒临灭绝,被列为国家一级保护植物。 进行珙桐组织培养快速繁殖技术研究,为保护我国珍贵的珙桐资源和珙桐苗木的产业化提供思路和技术,在理论研究和实际应用中都具有十分重要的意义。 本研究以珙桐冬芽、带芽茎段、叶片及茎段为材料系统地研究了珙桐组织培养直接和间接器官发生途径的各个培养阶段中基本培养基、生长调节剂和活性炭等因素的影响,筛选出了各阶段的适宜培养基,成功地获得了珙桐组织培养再生植株,建立了系统的珙桐组织培养植株再生体系。 初代培养阶段,通过正交实验方案,以珙桐冬芽、叶和茎段等为外植体,诱导冬芽的萌发和愈伤组织的发生。结果表明,WPM+2.0mg/LBA+0.1mg/LNAA为诱导珙桐冬芽萌发的适宜培养基;以二年生实生苗的叶和茎段为外植体诱导愈伤组织,由于消毒过程的药害作用导致没有愈伤组织的发生;以珙桐无菌芽叶片和叶柄诱导愈伤组织则获得成功,适宜的培养基分别为WPM+2.0mg/LBA+0.5mg/L2,4-D和WPM+2.0mg/LBA+2.0mg/LNAA。 继代增殖培养阶段,通过L9(3~3)正交实验,得出适于诱导珙桐芽的增殖培养基为WPM+2.0mg/LBA+0.1mg/LZT,BA为主要影响因素;愈伤组织增殖培养则以WPM+1.0mg/LBA+0.5mg/LNAA+2.0mg/LZT为宜,增殖速度快,褐化程度小。 分化培养阶段,通过L16(4~4)正交实验,得出以无菌苗带芽茎段诱导腋芽的萌发以WPM+2.0mg/LBA为最适培养基,将该结论应用于野外采集的珙桐带芽茎段同样获得了成功,诱导率达91.7%;通过L9(3~3)正交实验推出愈伤组织诱导芽的分化以WPM+3.0mg/LBA+0.5mg/LKT+0.1mg/LIBA为适宜培养基。 壮苗培养阶段,WPM+1.0mg/LBA+1.0mg/LNAA为适宜培养基;生根阶段,从生根率和生根质量综合考虑,最适培养基为WPM+1.0mg/LNAA+0.5g/LA.C,生根率可达86.7%。将生根苗转入WPM无激素培养基生根后壮苗培养,有利于提高移栽成活率。炼苗移栽阶段以泥炭+珍珠岩(2:1)为最适移栽基质,并浇以改良霍格兰营养液,成活率可达73.3%。
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