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1目的本课题在国家自然科学基金项目(No：30873443)研究内容的基础上,采用自乳化滴丸给药系统,以川芎、川芎嗪、冰片为组方,研究芎冰自乳化滴丸的制备方法,评价芎冰自乳化滴丸的质量,考察制剂体外释药特点,及采用微透析采样技术研究芎冰自乳化滴丸在SD大鼠体内的药动学特征。并以芎冰微乳为参比进一步说明新制剂的动力学特点。2方法2.1川芎醇提取液纯化工艺研究建立川芎中阿魏酸(FA)成分的HPLC含量测定方法。采用大孔吸附树脂分离纯化技术对川芎醇提取液进行FA纯化工艺影响因素考察,较大程度地富集FA,为芎冰自乳化滴丸的制备提供稳定的中间体。2.2芎冰自微乳体系的制备以川芎嗪(TMP)的溶解度为指标优选自微乳处方辅料,采用滴定法绘制伪三元相图优选空白微乳处方,以微乳的粒径、药物溶解度为指标进行处方优化；并以自乳化速率为指标,考察制备工艺对自微乳化浓缩液自乳化能力及成型的影响,确定芎冰自微乳的组方及制备工艺。2.3芎冰自乳化滴丸的制备单因素试验考察滴丸的基质、冷凝剂的种类,自微乳处方与滴丸基质的比例；以基质组成、药物与基质的比例、滴速、温度、等作为考察因素,硬度、圆整度、拖尾、黏连程度为评价指标正交试验优化滴丸制剂工艺。2.4芎冰自乳化滴丸的质量标准研究考察芎冰自乳化滴丸的性状、乳化后的粒径分布、黏度、自乳化效率,以及滴丸丸重差异、融散时限、稳定性；对其主要成分FA、TMP、冰片进行薄层色谱鉴别；建立主要成分的含量测定方法,并进行含量测定。2.5芎冰自乳化滴丸体外释药特性研究通过模拟体内生理环境,在不同介质、不同条件下考察体外释药特点；考察滴丸形成ME后的外观性状、粒径分布、黏度,研究外部因素对ME自微乳化过程及ME形成的影响,预测滴丸进入体内后的自乳化效果。2.6芎冰自乳化滴丸的体内药动学研究应用微透析采样技术同时取样测定大鼠脑局部血药浓度和静脉血药浓度随时间变化情况,绘制药-时曲线,通过DAS2.1软件处理数据,拟合最佳房室模型,并以芎冰微乳为参比制剂,阐明滴丸制剂的药动学特征。3结果3.1川芎醇提液纯化工艺研究HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱,树脂柱径高比为1：8,将川芎醇提液(生药质量浓度为0.5 kg·L-1)按树脂药材质量比为2：1精密量取适量,以2 BV·h-1的流速上柱吸附,静止2 h后,用pH 3.0的FA水溶液以10 BV·h-1的流速用2 BV清洗杂质。再用10 BV质量分数为50%的乙醇溶液以8 BV·h-1的流速进行解吸,收集洗脱液,平行3份,减压浓缩后置真空干燥箱内干燥,称定质量,精密称取适量测定FA的含量,计算固形物收率,测定固形物中FA的含量。结果固形物收率分别为2.07%、2.02%、2.04%,平均收率为2.04%,RSD=1.25%；FA转移率分别为83.67%、84.65%,86.09%,平均转移率为84.80%,RSD=1.44%,固形物中FA中的含量分别为33.19 mg·g-1、34.09mg·g-1、33.58 mg·g-1,平均含量为33.62 mg·g-1,RSD=1.34%,FA较大程度地富集,含量稳定,可为制剂提供稳定的中间体。3.2芎冰自微乳的制备以TMP溶解度为指标筛选微乳辅料,结果TMP在油酸乙酯和各乳化剂、助乳化剂中的溶解度均较好。微乳伪三元相图研究表明,油酸乙酯/EL-35、OP(1：1)／丙三醇、无水乙醇(6：1)组合(Km=1.5：1)所得微乳成乳区域大,微乳形态良好。在伪三元相图研究的基础上,以微乳的粒径、溶解度为指标考察微乳油相、混合乳化剂对自微乳成型的影响,确定芎冰自微乳给药系统制备方法为：油酸乙酯,聚氧乙烯蓖麻油(EL-35),OP乳化剂,丙三醇,乙醇,按10：18：18：21：3的比例在37℃,400 r·min-1磁力搅拌20 min,加入500 g川芎药材的提取纯化物、川芎嗪2.5 g,冰片0.5 g,超声溶解,搅拌均匀,得芎冰SMEDDS。3.3芎冰自乳化滴丸的制备芎冰自乳处方,按1：3比例加入到熔融的基质中(PEG 4000与PEG 6000的比例为1：1),混合均匀,80℃保温,以45d·min-1的滴速滴入液体石蜡中(滴距6 cm),冷却,固化成丸,取出,风干,即得。3.4芎冰自乳化滴丸的质量标准研究本品在常温下为棕黄色滴丸。取3批滴丸进行测定,结果3批滴丸加蒸馏水乳化自乳化的时间分别为8 min15 s、8 min35 s、8 min9 s,粒径分别为43.0 nm、45.1 nm、44.3 nm, RSD为2.15%,且粒径分布均匀；粒径分别为平均黏度为：2.83mPa·s,RSD=1.87%。对滴丸进行了薄层色谱鉴别,HPLC法测定FA和TMP的含量。结果芎冰自乳化滴丸中可检出FA、TMP、冰片；并根据对3批滴丸含量测定结果,规定每丸含TMP不低于0.30 mg, FA不低于0.04 mg、冰片不低于0.06 mg。稳定性考察结果表明,滴丸在室温(25℃)避光放置3个月,外观为棕黄色、完整、色泽均匀、硬度适宜；平均粒径及自乳化效率未有明显变化；有效成分含量较稳定。3.5芎冰自乳化滴丸体外释放特性研究芎冰自乳化滴丸在人工肠液、人工胃液和蒸馏水中药物释放速度一致,且20 min内溶出度均超过95%,溶出较快。通过对自微乳化影响因素考察,介质、稀释倍数的影响不显著,均具有较好的乳化效果,可以预测滴丸进入体内后,外观性状良好、粒径分布均匀,可自发形成ME。3.6芎冰自乳化滴丸体内药动学研究芎冰自乳化滴丸口服给药后,药时浓度数据经DAS2.1软件处理,滴丸组与微乳组均呈一级速率、一室模型。滴丸制剂主要成分TMP在血液和脑中AUC、Cmax与芎冰微乳相比均无显著性差异,表明自乳化滴丸制剂具有与微乳制剂相当的疗效,生物利用度均较好。而消除半衰期(T1/2)、MRT0-∞与微乳口服给药具有显著差异,血、脑中的平均滞留时间分别为微乳的1.21、1.13倍,消除半衰期分别为微乳的1.24、1.19倍,表明滴丸在血液和脑组织中的消除速度比微乳更缓慢,药物有体内滞留时间时间延长。4结论本研究利用大孔吸附树脂吸附技术使FA得到较大程度富集和纯化,为制备芎冰自乳化滴丸提供稳定的中间体,自乳化滴丸制备工艺可行,质量稳定。自乳化滴丸给药系统可有效提高难溶性药物的溶解度,提高液态不稳定药物的稳定性。动力学研究表明,本制剂经胃肠道可自乳化,粒径小且分布均匀,可使被包容的药物分散度提高,药物吸收改善,具有较好生物利用度；消除半衰期、体内滞留时间较长,有利于药效的发挥,是一种具有巨大研究价值和发展前景的新型给药系统。