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糖尿病(Diabetes Melltus,DM)是由多种病因引发的以血糖水平升高并伴有血脂等为特征的代谢性疾病。Ⅱ型糖尿病发生的关键之一为胰岛素靶组织(主要是肝脏、肌肉和脂肪组织等)对胰岛素的敏感性降低,即所谓的胰岛素抵抗。目前关于胰岛素抵抗发生的机理有五种学说:1)游离脂肪酸学说;2)内分泌和炎症学说;3)线粒体功能障碍学说;4)氧化应激学说;5)内质网应激学说。与其他的学说相比,线粒体功能障碍学说在脂肪组织胰岛素敏感性中的作用近年来受到越来越多学者的关注。 马蔺(Iris lactea Pall.var.Chinensis(Fisch.)Koidz)是被子植物门(Angiospermae)鸢尾科(kidaceae)鸢尾属(Iris)的多年生草本宿根植物。现代药理学研究发现马蔺具有多种活性,如抗肿瘤、放射增敏、抗辐射、抗氧化、抗生育、抗着床等。但是对马蔺的药理活性研究多局限于马蔺子素的放射增敏作用,而对其他成分及其功效研究尚不深入。因此基于前期的研究内容,本论文利用3T3-L1脂肪细胞建立的胰岛素抵抗模型,对前期已分离纯化得到的马蔺种子中的原花青素和低聚芪类单体化合物对脂肪细胞分化的影响、改善胰岛素抵抗及线粒体功能作用进行了更加深入的研究。 1、利用“鸡尾酒法”诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,通过MTT、油红O染色、TG含量测定、细胞周期测定及Western blotting和RT-PCR等方法研究马蔺化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果发现原花青素类的化合物都能抑制胞浆内脂滴的产生及减少甘油三脂的含量;而低聚芪类化合物VitisinA、Vitisin B和Cis-vitisinA能明显抑制脂肪细胞分化;而化合物Vitisin C和Vitisin D却能促进脂肪细胞的分化。 2、基于IR模型,借助FCM检测马蔺化合物对处于胰岛素抵抗状态下的脂肪细胞对葡萄糖类似物的摄取情况,同时采用Western blotting检测3T3-L1脂肪细胞中AKT蛋白的磷酸化表达水平,其实验结果表明马蔺化合物干预后,都能不同程度促进胰岛素刺激下脂肪细胞对2-NBDG的摄取。 3、对马蔺化合物处理后的3T3-L1脂肪细胞中的细胞线粒体内源性活性氧水平、线粒体膜电势、线粒体质量数及ATP含量进行了测定。研究结果发现马蔺化合物中原花青素和低聚芪类各单体化合物作用后细胞线粒体活性氧水平均有所下降;线粒体膜电势水平均有所升高;ATP含量均有所增加;线粒体质量数也均有所增加。其中原花青素类的Procyanidin B3和Procyanidin B1及低聚芪类的VitisinA和Cis-vitisinA在改善线粒体功能方面表现出良好的作用效果。 4、对马蔺化合物处理后的3T3-L1脂肪细胞线粒体生物发生进行研究,实验结果发现原花青素和低聚芪类都能不同程度恢复已受损的线粒体DNA片段;原花青素和低聚芪类对融合蛋白的表达影响不明显,而分裂蛋白Drp1相比于Mod都能不同程度地降低。最后针对线粒体生物发生相关基因的表达实验发现原花青素和低聚芪类处理后均能不同程度增加PGC-1α、NRF1和Tfam这三者基因的表达水平。