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脑胶质瘤是一种严重威胁人类生命和生存质量的恶性肿瘤，也是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤，约占颅内肿瘤40％。尽管手术切除、放疗、化疗等治疗方法有很大进展，但是胶质瘤病人预后仍然很差，特别是恶性胶质瘤，其平均生存期不足1年。近20多年来对中枢神经系统和胶质瘤免疫学特性的深入研究发现：中枢神经系统并非如以前认为的“免疫特赦器官”；小胶质细胞能呈递抗原；胶质瘤细胞在体内外检测，均可表达MHC类抗原等。这些发现为胶质瘤的免疫治疗提供了理论依据，免疫治疗被视为继手术、放疗、化疗之后的第4种肿瘤治疗模式。 胶质瘤患者临床免疫治疗方案的确立均基于动物实验的有效性，而实验动物模型的选择是保证实验结果可靠性的基础环节。9L／Fischer344和C6／Wistar或C6／SD大鼠脑胶质瘤模型，是胶质瘤治疗实验研究中最常用的动物模型。国外近些年研究发现，C6大鼠胶质瘤细胞MHC中表达的单倍体基因RT1~μ与BDⅨ、BDX、SD、Wistar等各种系大鼠的MHC均呈异源性。异源基因型的C6大鼠胶质瘤模型自身能够产生强烈的免疫排斥反应，导致了该类模型中出现了肿瘤不能持续生长，甚至自行消退的现象，从而混淆了治疗处理所产生的效果。C6大鼠胶质瘤模型的缺陷，限制了其在脑胶质瘤治疗研究中的应用，尤其不适合用于免疫治疗的研究，国外学者建议应采用同源基因型的9L／Fischer344模型。而国内的脑胶质瘤治疗实验研究大都采用的是C6大鼠胶质瘤模型，未见9L模型。 本研究通过采用立体定向技术，大鼠脑内接种定量的肿瘤细胞，建立9L／Fischer344大鼠脑内胶质瘤模型，观察大鼠脑内肿瘤生物学特性，并与在相同的实验条件下建立的C6／Wistar模型进行比较研究，为后续的脑胶质瘤治疗的实验研究提供可靠的动物模型。 第一部分:gUFischer344大鼠脑胶质瘤模型的建立目的: 建立稳定的同源基因型gL用lscher344大鼠脑胶质瘤模型。方法: 1.gL细胞在含1oo’oFes、青霉素looU/ml、链霉素100林留ml的DMEM 完全培养基中，20%coZ、37℃、饱和湿度条件下培养瓶中单层培 养。肿瘤细胞呈对数生长期时收集细胞，漂洗，计数，加PBS调 整浓度。 2.大鼠随机分为3组，采用立体定向技术，每只大鼠右侧额叶尾状 核区分别接种5.oxloZ、一oxl05、l.oxl06不同数量的gL细胞。 3.连续观察大鼠生存状态，记录大鼠生存时间。 4.定期M班检查，观察大鼠脑内肿瘤生长情况。 5.大鼠死亡后，脑标本制片，肿瘤组织病理学观察，GF”和s一100 蛋白免疫组织化学检测。结果: 1.所有大鼠在接种后50天的观察期内全部死亡。各组平均生存时间 分别为35.3士5.1、24，4料.5、15.5士1.6天。 2.接种1.0x105 gL细胞的大鼠，于接种后第10、14、20天M班增 强扫描，脑内接种部位均见肿瘤存在，并呈持续生长。 3.组织病理学观察，大鼠脑内均见肿瘤形成，未见肿瘤颅外生长; 肿瘤周边界线较明显，但未见包膜，肿瘤细胞向周边脑组织内浸 润;瘤内及肿瘤周边新生血管丰富，瘤内多可见出血、坏死;肿 瘤细胞免疫组织化学GFAP和S一1 00蛋白染色阴性。结论: 1.gL/Fischer344大鼠脑内胶质瘤模型成功建立。该方法建立的大鼠 脑胶质瘤模型稳定可靠，大鼠脑内肿瘤持续生长，符合恶性胶质 肉瘤生物学特性。 2.脑内接种1.0、105 gL细胞建立的模型用于治疗实验研究时，治疗 处理时间以细胞接种后第2周为宜。第二部分:，L/Fischer344与c6解istar两种大鼠脑胶质瘤模型的比较研究目的:gL/Fischer344和C6阿istar两种大鼠脑胶质瘤模型的比较研究。方法: 1. 2. 4.结果:采用立体定向技术，大鼠脑内接种定量肿瘤细胞建立模型。观察模型大鼠生存状态、生存时间。定期取大鼠脑标本，观察脑内成瘤情况和肿瘤组织病理学特点。免疫组织化学方法，观察大鼠脑内肿瘤淋巴细胞浸润情况。9L肠scher344模型脑内均有肿瘤持续生长;接种1 .0xl护、1 .5x1069L细胞的大鼠，平均生存时间分别为23.6士1.1、14.2士0.8天;肿瘤组织病理学具有恶性脑胶质瘤特点。接种1.0xl05、1.5、10“细胞的c6八Vistar模型脑内肿瘤不能持续生长。接种后2周内，大鼠脑内可见肿瘤生长，但肿瘤周边及瘤内多见淋巴细胞浸润，肿瘤血管周围形成“淋巴细胞血管套”;接种3周后，脑内肿瘤仅见残留轨迹和含褐色色素沉着的吞噬细胞。免疫组织化学研究观察发现，肿瘤局部CD68、CD4、cDS阳性的淋巴细胞在C6阿IStar模型中多见;gL邝ischer344模型中可见cD68阳性细胞，但数量明显较c6模型中为少(p<0.01)，未见CD4、CDS阳性细胞。结论: 1.gL邝ischer344大鼠脑胶质瘤模型稳定性高，重复性好。肿瘤组织学特点与人脑恶性胶质瘤相近。C6八Vistar模型脑内肿瘤不能持续生长，脑内肿瘤可自发性消退。免疫组化观察发现肿瘤周边及瘤内淋巴细胞浸润明显，存在较强的细胞免疫反应，可能是肿瘤的消退的原因。该模型不适合用于胶质瘤治疗、尤其是免疫治疗的实验研究。