[目的]随着生活水平的逐渐提高,人们对身体健康越来越重视,因此对能提高身体免疫能力物质的关注逐渐提高,像冬虫夏草等。但是冬虫夏草十分稀少,由于北虫草和冬虫夏草有着相似的有益物质,比如虫草素等,并且价格又相对低廉,因此逐渐进入人们的视线。提取北虫草中虫草素的传统方法效率不高,此外,虫草素与壳寡糖都能够单独提升免疫功能,但是关于两个联合作用的免疫功能研究比较少。所以此实验的研究目的是研究新的提取溶剂低共熔溶剂对虫草素的提取效果和探索低共熔溶剂提取虫草素的最佳条件,同时探索虫草素联合壳寡糖的免疫调节功能。[方法]1虫草素的提取1.1北虫草的粉碎北虫草于60℃烘干8小时,用粉碎机磨碎,60目筛网过滤,置于干燥器中备用。1.2溶剂的制备将氯化胆碱和尿素,氯化胆碱和丙三醇,氯化胆碱和乙二醇分别按照1:2的的比例添加到锥形瓶,在60℃的温度下搅动,直至形成无色的混合物。将乙醇和水按照3:1比例添加到锥形瓶,形成混合溶液。1.3单因素实验分别改变溶剂,温度,时间,含水量,料液比等条件,固定其他条件,观察在超声的作用下这些要素对虫草素提取效率的作用。1.4正交实验选取温度、料液比、时长和含水量为4个要素,每个要素选3个水平,研究4要素对虫草素提出效率的作用,选用L9正交分析表,得到最佳的条件。2虫草素、壳寡糖和虫草素联合壳寡糖的免疫功能实验2.1实验动物的分组和给药在正式给药之前,昆明小鼠在动物房进行一周时间的适应性喂养。将小鼠随机分成7组,每组40只,分别为空白组,虫草素低浓度组(40mg/kg),虫草素高浓度组(80mg/kg),壳寡糖低浓度组(200mg/kg),壳寡糖高浓度组(400mg/kg),虫草素低浓度(40mg/kg)和壳寡糖低浓度(200mg/kg)混合组,虫草素高浓度(80mg/kg)和壳寡糖高浓度(400mg/kg)混合组。每天给昆明小鼠进行灌胃,持续30天,空白给以相应量的0.9%氯化钠。2.2实验动物的免疫功能的实验分别对各组进行ConA诱导的脾淋巴细胞转化实验,绵羊红细胞(SRBC)诱导迟发型变态反应DTH,血清溶血素的测定(血凝法),碳廓清实验,NK细胞活性测定,称量体重、胸腺重和脾脏重。[结果]1虫草素的提取实验1.1氯化胆碱和尿素1:2作为溶剂提取效率最高。1.2随着时长的增长,虫草素的提取率随着上升,到了 30分钟后,随着时长的延长,虫草素的提取率随之下降,在30分钟的时候到达最高。1.3虫草素的提取率随着料液比的加大,虫草素的提取率随着上升,虫草素的提取率在料液比为1:200和1:300相差不大。1.4随着温度的提升,虫草素的提取率提升,到60℃的时候到达最大为80.8%,当温度再次提升,虫草素的提取率反而下降。1.5当含水量上升,虫草素的提取率随着上升,当含水量进一步上升,虫草素的提取率反而下降,在含水量为40%达到最高。1.6用正交实验法得到最优条件,料液比为1:300,温度为60℃,时长为50分钟,含水量为20%,提取率为84.2%。2虫草素、壳寡糖和虫草素联合壳寡糖的免疫功能实验2.1实验组和对照组在脾脏/体重比、胸腺重/体重比、血清溶血素、NK细胞活性、肌酐和尿素氮无统计学差异(P>0.05)。2.2虫草素低剂量组和正常组的淋巴细胞增殖能力有统计学差异(P<0.05),其他组和正常组无统计学差异(P>0.05)。2.3虫高、混高和正常组的迟发型变态反应能力有统计学差异(P<0.05),其他组和对照组无统计学差异(P>0.05)。2.4虫低组和正常组的小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力有统计学差异(P<0.05),其他组和正常组无统计学差异(P>0.05)。2.5实验组和对照组在谷草转氨酶和谷丙转氨酶的指标无统计学差异,在总胆固醇和胆红素有统计学差异,在总胆固醇中,壳低、混低和正常组有统计学差异(P<0.05),在胆红素的指标中,混低组和对照组有统计学差异(P<0.05),其他组和正常组无统计学差异(P>0.05)。[结论]1.本实验把低共熔溶剂作为提取溶剂,并运用单因素实验法对温度、料液比、提取时长和含水量进行优化,用正交实验法得到最优状态,料液比为1:300,温度为60℃,时长为50分钟,含水量为20%,提取率为84.2%。2.虫草素和壳寡糖联合作用可以提升昆明小鼠的迟发型变态反应的能力,但是不可提升淋巴细胞增殖能力、NK细胞的活性和巨噬细胞吞噬能力。3.低浓度虫草素可提升淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬能力,但是不可提升迟发型变态反应能力、NK细胞活性和溶血素指数。4.壳寡糖不能增强淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬能力、迟发型变态反应能力、NK细胞活性和溶血素指数。