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糖尿病属于慢性代谢障碍性疾病,现已成为继肿瘤、心血管疾病之后的第三大严重威胁人类健康的重大疾病,往往表现为多器官功能失调和营养物质代谢紊乱,引起营养不良和糖尿病并发症的发生。肠内营养支持是糖尿病患者首选的预防与纠正营养不良及辅助控制血糖的重要措施。随着临床营养支持个性化、系统化的发展需求,强调特殊营养组分和功能成分的新型个性化糖尿病肠内营养制剂成为糖尿病营养支持发展的重要方向。本论文创新性提出将海带(Laminaria japonica)多糖和牛磺酸(Taurine)协同作为活性功能成分强化应用于糖尿病肠内营养制剂配方设计中,以期达到辅助控制血糖,改善代谢,并供给均衡充足营养,为患者提供个性化营养支持。本文对海带多糖和牡蛎中牛磺酸的提取制备、降血糖活性以及活性组分强化的糖尿病肠内营养制剂配方设计等进行了系统性研究,获得了以下主要研究成果。 1.根据糖尿病及其并发症的同一发病机制,即高血糖造成损伤的共同基础-氧化应激,以及碳水化物在人体消化道代谢特点,联合抗氧化活性与糖苷酶抑制活性,系统性的比较了海带多糖八种不同提取方法,结果发现超声提取法具有较高的多糖得率,并且得到的多糖组分具有较强的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。优选超声提取法作为海带活性多糖的制备方法。 2.通过响应面法优化海带多糖超声提取工艺,获得最佳工艺参数为:料水比1∶50,超声时间54 min,超声温度80℃,超声功率1050W。在该实验条件下,多糖提取率为5.75±0.30%,与预测结果5.67%接近。体外抗氧化与糖苷酶抑制活性研究发现,粗多糖组分(LJP)、C0-30%乙醇分级组分(LJP1)、C30-60%乙醇分级组分(LJP2)都具有较强的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性。LJP2具有更好的降血糖活性潜力,在5.0 mg/mL时,LJP2对α-葡萄糖苷酶抑制率与阿卡波糖接近,经DEAE-52纤维素柱层析分离发现,只含有0.5 mol/L NaCl洗脱出的单一酸性多糖组分,初步判断LJP2可能主要含海带岩藻聚糖,但需要进一步深入验证和结构表征研究。 3.考察了超声提取法和蛋白酶酶解法对牡蛎中牛磺酸的提取效果,获得碱性蛋白酶作为优选酶种,通过正交实验获得超声提取和碱性蛋白质最佳工艺条件,并且最优工艺条件下牛磺酸得率分别为,0.276±0.013%和0.746±0.53%,结合最佳超声工艺条件和碱性蛋白酶酶解条件下进行超声辅助酶解制备牛磺酸,结果牛磺酸得率提高至0.782±0.023%,明显高于超声提取和碱性蛋白酶酶解提取,优选超声辅助碱性蛋白酶酶解制备牡蛎中牛磺酸。 4.通过建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,研究LJP、LJP1、LJP2、牛磺酸以及牛磺酸与LJP复合组分体外降血糖功效,结果发现,LJP、LJP1、LJP2多糖样品能明显增强HepG2细胞对葡萄糖的消耗,以及显著提高胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的消耗,增强对葡萄糖的摄取和利用,并且增强作用LJP2>LJP1>LJP,而牛磺酸以及牛磺酸与LJP复合组分未显示出促进HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的消耗作用;结合抗氧化活性与糖苷酶抑制活性可以得知,三种海带多糖组分具有一定的潜在降血糖功效,以C30-60%(LJP2)乙醇分级组分最强。 5.利用海带活性多糖LJP2和牛磺酸进行营养制剂强化,规划求解进行配方设计。得到100g的糖尿病肠内营养制剂(ENFDM)三大产能物质组成为:蛋白质19.39g,脂肪13.79 g,碳水化合物62.06g。其中蛋白组成:大豆分离蛋白16.45g/100g,大豆肽0.5g/100g,牡蛎肽2.4g/100g,并且整蛋白含量为80%,短肽为17%,游离氨基酸为3%;脂肪组成:橄榄油5.52g/100g,鱼油0.83g/100g,中链甘油三酯8.19g/100g,并且MCT/LCT=1.5,n-6/n-3=4;碳水化合物组成:麦芽糊精24.83g/100g,缓释淀粉37.24g/100g,膳食纤维8.3 g/100g;活性成分:LJP2为1.18g/100g,牛磺酸22.5-67.5 mg/100g。另外制剂能量密度为4.5kcal/g,非蛋白热氮比为120∶1,糖脂供能比为2∶1。