论文部分内容阅读
细环病毒是无囊膜DNA病毒,该病毒核酸类型为单股、负链、环状DNA病毒。细环病毒目前归属于指环病毒科细环病毒属。目前,细环病毒已经在猪、牛、羊、猫、狗等多种动物体内也相继发现。猪细环病毒在全世界多个国家和地区均有报道,表现为有较高的猪群感染阳性率。目前的研究材料表明,猪细环病毒与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒可协调致病,其共感染可诱发猪皮肤肾炎综合症;和其他猪群常见病原(如猪圆环病毒)共感染可诱发断奶仔猪代谢综合症。目前,对猪细环病毒的研究不多,急需对其进行更进一步的深入研究。为明确猪细环病毒 k2 型(porcine Torque tenosus virus k2,PTTSuVk2)福建株ORF2基因的特征,本研究采用分段扩增的办法从猪细环病毒k2型感染阳性粪便中扩增PTTSuVk2型福建株ORF2基因,对PCR扩增产物胶回收后,进行克隆测序拼接处完整的PTTSuV k2型福建株ORF2基因,通过分子生物学软件对其编码蛋白进行生物信息学分析。结果表明,PTTSuVk2福建株ORF1基因全长为600 bp,编码199个氨基酸。核苷酸同源性比较结果表明,本实验株PTTSuV K2 ORF3基因和中国猪细环病毒分离株TTV2XYF7(GenBank登录号JX535334)核苷酸同源性最高,高达99.0%,和猪细环病毒k2型代表株德国家猪分离株2p株(GenBank登录号AY823991)核苷酸同源性为98.8%。其和猪细环病毒1a型代表株日本分离株Sd_TTV31株(GenBank登录号AB076001)核苷酸同源性仅为38.8%,和猪细环病毒1b型代表株日本分离株德国家猪分离株1p株(GenBank登录号AY823990)核苷酸同源性仅为43.1%。为建立检测猪细环病毒k2型SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,本研究根据猪细环病毒 k2 型(Porcine Torque tenosus virus k2,PTTSuVk2)ORF2 基因特征设计特异性的引物,建立SYBR Green I检测猪细环病毒k2型的实时荧光定量PCR方法。该方法检测猪细环病毒k2型ORF2基因1.92×102～1.92×107拷贝/μL反应范围内有很好的线性关系。扩增产物溶解曲线分析仅出现单一特异峰,无引物二聚体,Tm值为83.83±0.08℃,对猪圆环病毒(PCV1和PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪博卡病毒5型(PboV5)、猪细环病毒1a型(PTTSuV1a)和1b型(PTTSuV 1b)核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.39%～1.69%,组间变异系数0.69%～2.19%。本方法的建立可用于定量分析猪细环病毒k2型感染噬性组织器官和感染程度,为研究猪细环病毒k2型的致病机制奠定基础。