论文部分内容阅读
背景黑色素瘤起源于生黑色素细胞,它是皮肤癌中侵袭能力最强的一类肿瘤。虽然黑色素瘤患者的数量占皮肤癌患者总量的比例较低,但是在因皮肤癌死亡的患者中绝大部分为黑色素瘤患者。对于转移的且手术无法摘除的黑色素瘤患者,需要采用其它的一些常规方法,包括化疗、靶向分子药物治疗、免疫治疗和放疗等。然而,这些手段产生的治疗效果通常不佳(3年的生存率低于15%)且病人的临床反应较差。因此,发展能对黑色素瘤进行早期高效诊断和针对转移性黑色素瘤进行有效治疗的方法尤为重要。目的通过自组装构建超级纳米颗粒(Nanoparticles,NP),负载了光敏剂(prolipid)和靶向杀伤性多肽(α-melittin),可对黑色素瘤进行双模成像(NIR/MRI)和具有靶向的双模治疗(光动力作用/杀伤性多肽α-melittin)。以达到早期检测,控制肿瘤生长和复发的目的。方法1.负载杀伤性多肽和光敏剂的磁性纳米颗粒(α-melittin-pro-NP)的制备及表征将氧化铁纳米颗粒,磷脂和光敏剂溶于氯仿,并混合。采用水合乳化法使其自组装成为球形纳米结构,冷却后并加入改良后的蜂毒肽(α-melittin),置于冰盒,摇床摇3h,形成α-melittin-pro-NP。将制备好的α-melittin-pro-NP通过电镜和水合粒径测定α-melittin-pro-NP直径和UV光谱仪器测其紫外吸收光谱。2.检测α-melittin-pro-NP的生物安全性和SR-B1受体靶向性验证通过红细胞溶血实验检测纳米材料的生物安全性;通过细胞流式仪检测细胞对α-melittin-pro-NP的摄取情况和Western Blot实验验证纳米材料具有SR-B1靶向性。3.细胞实验通过激光共聚焦观察药物在细胞的分布情况;MTT实验来检测α-melittin-pro-NP对细胞杀伤作用;利用细胞流式仪检测α-melittin-pro-NP对细胞凋亡的影响;体外培养树突(DC)细胞,验证α-melittin-pro-NP能够激活DC细胞,从而激活T细胞介导的免疫反应,从而抑制并杀伤肿瘤细胞。结果1.制备的α-melittin-pro-NP溶液均匀,无沉淀,具有良好的稳定性;通过透射电镜和水合粒径检测纳米材料的平均粒径分别在在10nm和100nm;UV光谱扫描结果prolipid和α-melittin-pro-NP在670nm波长均下有特征吸收,证明了光敏剂prolipid已经修饰到了α-melittin-NP表面。2.当浓度为10μM时,melittin的溶血率接近100%,而α-melittin-pro-NP的溶血率为20%左右;通过对比不同细胞摄取纳米材料和Western Blot结果,α-melittin-pro-NP高效靶向表达SR-B1受体的B16-F10细胞。3.通过激光共聚焦观察B16-F10细胞通过内吞作用,将α-melittin-pro-NP摄取到细胞质中;MTT实验结果表明,当α-melittin-pro-NP浓度为1μM时,非光照组和光照组对B16-F10细胞的增殖抑制率分别为30%和90%;细胞凋亡实验结果表明:对照组,α-melittin-pro-NP组,α-melittin-pro-NP+光照组的细胞凋亡率分别为3.18%,47.56%,90.8%;体外激活DC细胞结果表明当α-melittin-pro-NP浓度为10μM时,DC细胞激活比例比对照组高37%。结论本课题成功合成了可同时装载蜂毒肽α-melittin和光敏剂prolipid的新型纳米材料α-melittin-pro-NP,该纳米材料具有良好的生物相容性,可以近红外成像观察肿瘤位置和大小,还可以通过光动力和α-melittin的杀伤性协同作用来发挥出良好的抗黑色素瘤活性。