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背景与目的：肿瘤免疫治疗是肿瘤治疗的重要手段之一。调节性T细胞(regulatory T, Treg)是一种免疫抑制性细胞,在肿瘤免疫中起重要作用。明确免疫抑制性细胞与肿瘤患者的临床病理特点及治疗效果的关系。有效地体外扩增获得杀伤广谱的效应细胞,一直是肿瘤免疫治疗中亟待解决的主要问题。本研究通过检测外周血Treg表达水平,探讨胰腺癌患者外周血Treg细胞水平的变化及其临床意义；同时通过RetroNectin法培养高效的效应细胞,探讨其在体外对于胰腺癌细胞的杀伤效应。材料和方法：收集2006年10月至2009年3月我院胰腺癌患者外周血标本62例,健康人志愿者外周血标本30例。用流式细胞仪检测CD4+CD25high调节性T细胞比率变化差异,并分层分析探讨Treg细胞表达与胰腺癌分期和预后的关系；以免疫磁珠法获取外周血CD56+T细胞后用RetroNectin法培养获得NK效应细胞,并用MTS法对于JF-305人胰腺癌细胞株进行体外杀伤实验。通过表型检测、增殖测定以及杀伤率测定,分析RetroNectin法获得的NK细胞对于胰腺癌细胞杀伤作用的影响。结果：胰腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞富含于CD4+CD25high调节性T细胞群中,其占CD4+T细胞的比率为(15.16±13.97)%,明显高于健康人群(3.38±1.70)%(P<0.001)。胰腺癌Ⅰ-Ⅱ期患者,其外CD4+CD25high调节性T细胞占CD4+T细胞的比率为(14.53±6.95)%(n=13)：III期为(17.75±18.66)%(n=31)；Ⅳ期为(18.48±21.27)%(n=18)。各期CD4+CD25high调节性T细胞占CD4+T细胞的比率均显著高于健康人群水平(P<0.001)；进一步分析显示其与患者的年龄、性别及胆红素水平、CA199水平、TNM分期无关；同时将其术前、术后外周血的水平进行比较结果显示：治疗性手术后比率下降具有统计学差异；生存分析显示其与预后无关,TNM分期为独立预后因素。RetroNectin法培养效应细胞结果显示：RetroNectin法协同抗CD3抗体培养可以更高效的获得的效应细胞,2周时的增殖倍数可以达到371倍。表型的检测发生明显变化,RetroNectin法获取的NK效应细胞明显高于其他两组。体外杀伤实验结果显示：RetroNectin组培养获得的效应细胞在各效靶比杀伤下,杀伤活力明显高于另外两组。结论：对CD4+CD25high调节T细胞的鉴定显示其富含Foxp3+细胞,本实验条件下的CD4+CD25high调节T细胞可以代表功能性的Treg细胞水平。胰腺癌患者外周血CD4+CD25high调节T细胞水平较健康对照者明显升高。非脾切除的治疗性手术后外周血treg细胞水平较术前明显下降。胰腺癌患者术前外周血Treg水平与预后无关。进一步的实验显体外实验显示RetroNectin法培养效应细胞NK细胞表型发生改变。联合CD3抗体培养增殖活性明显增强。RetroNectin法培养的NK细胞对于胰腺癌JF305细胞株的杀伤效率明显提高。因而如果能去除Treg细胞并联合应用高效的RetroNectin法培养的效应细胞,通过这两种免疫影响方式对胰腺癌进行治疗,未来可能成为胰腺癌免疫治疗新模式。