【摘 要】
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杨树因其生长迅速、适应性强等特点,已被广泛种植。为有效解决杨树病虫害问题,转基因技术越来越多的应用于杨树的抗虫研究。随着转基因植物的增多,对其检测技术水平的要求也越来越高,并且转基因植物的生物安全性问题也越来越受到重视。本论文以转Bt Cry1Ac基因741杨为对象,利用LAMP技术,建立了一套能够简便、快速、准确的检测杨树中外源基因的方法。对转Bt Cry1Ac基因107杨的干、根、根际土壤DN
【基金项目】
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“转基因生物新品种培育重大专项”（项目编号:2018ZX08021001）； 国家林业局科技发展项目“转双抗虫基因107杨环境释放和生产性试验安全性检测”（项目编号:JC-2017-01）； 河北省农业关键共性技术攻关专项“造林树种杨树等新品种选育及病虫害新型防治技术研究”（项目编号:17226321D）；
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杨树因其生长迅速、适应性强等特点,已被广泛种植。为有效解决杨树病虫害问题,转基因技术越来越多的应用于杨树的抗虫研究。随着转基因植物的增多,对其检测技术水平的要求也越来越高,并且转基因植物的生物安全性问题也越来越受到重视。本论文以转Bt Cry1Ac基因741杨为对象,利用LAMP技术,建立了一套能够简便、快速、准确的检测杨树中外源基因的方法。对转Bt Cry1Ac基因107杨的干、根、根际土壤DNA样本进行高通量测序,通过与非转基因107杨的对比,探究外源基因对其杨树自身内微生物群落多样性的影响。以及对转Bt Cry1Ac基因107杨试验林中三种不同栽培更新模式的非转基因杨树的干、根、根际土壤DNA样本进行高通量测序,探究转基因107杨对其邻近不同栽培更新模式的转基因受体（非转基因107杨）中微生物群落多样性的影响。主要研究结果如下:（1）利用针对转基因杨树建立的LAMP-PCR最优体系,对不同浓度即2倍倍比和10倍倍比稀释梯度下的DNA进行LAMP-PCR检测,电泳结果表明,与常规PCR相比LAMP-PCR获得了更为清晰的条带。除此之外,阳性反应的发生可以根据LAMP-PCR的副产物即焦磷酸镁的沉淀来直接观察,或者利用Gold View核酸染色剂对LAMP-PCR产物进行染色,根据产物的颜色直接进行判断。因此表明LAMP-PCR的具有较高的灵敏性和简便性。（2）利用针对转基因杨树建立的LAMP-PCR技术检测转基因741杨5个株系PB1、PB3、PB11、PB17、PB29中的Bt Cry1Ac和Npt II基因,均能稳定的扩增出清晰的弥散状条带。因此表明LAMP-PCR的具有较高的准确性和可靠性。（3）对转Bt Cry1Ac基因107杨的高抗株系Pb1和非转基因107杨的干、根和根际土壤DNA样品进行高通量测序,并对微生物群落组成的测序结果进行OTU聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、LEf Se分析等,结果表明在转基因和非转基因这两个株系之间均没有表现出明显的差异。（4）对转Bt Cry1Ac基因107杨试验林中三种不同栽培更新方式（移栽、萌生、嫁接）的非转基因107杨的干、根和根际土壤DNA样品进行高通量测序,并对微生物群落组成的测序结果进行OTU聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、LEf Se分析等,结果表明三种不同栽培更新模式之间均没有表现出明显的差异。（5）纵向综合（2）、（3）中杨树的干、根、根际土壤内微生物群落的高通量测序结果得出,根和根际土壤DNA样品中的微生物群落组成相似度极高,而二者均与干内DNA样品的微生物群落组成差异较大。相对而言,根和根际土壤内微生物的多样性高于干内微生物的多样性。
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