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手足口病已经成为严重危害我国儿童健康的传染病,然而目前没有针对性的药物或者疫苗。为了研究能预防手足口病重要致病微生物人肠病毒71型(EV71),本研究开展了对各种EV71疫苗的研究。
通过生物信息学、基因工程等技术克隆、表达并纯化得到了一系列多肽,这些多肽被分别用于EV71感染临床诊断和亚单位疫苗的研究,并对多肽-灭活疫苗免疫策略和机制作了初步探讨。同时利用反转录技术构建感染性克隆,以期获得缺陷型活病毒疫苗。
结果获得了:1.包括EV71 VP1蛋白3-30,79-105,163-177,208-222,237-255,266-293这些氨基酸残基的多表位多肽可以特异性检测抗EV71 IgM,可以用于临床EV71感染的早期诊断。2:用Ag85B、Flagellin或者Ag85B的CD4T细胞表位TB4T预免后再用对应的含有中和表位融合的蛋白免疫,但并没有提高或者说产生抗EV71的中和抗体,最可能的原因是这些融合蛋白本身太小,而中和线性表位不够强,因此不能有效产生抗体。3.原核表达的VP1蛋白本身不能产生中和抗体,但是VP1可以增强灭活疫苗的免疫效果,大大提高灭活疫苗产生的中和效价。VP1增强灭活疫苗的免疫效果可能是通过Th细胞起作用的。4.成功构建了表达。EV712A蛋白的各种Vero细胞系,为缺陷型病毒的构建提供了基础。同时顺利将EV71全长cDNA克隆到pBR322中,为感染性克隆的构建提供了前期准备。
本研究为EV71疫苗的开发作了有益的理论探讨。