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目的Numb基因是新发现的细胞命运决定因素。它与多种肿瘤的发生和发展密切相关,在之前的实验当中,我们课题小组在前期的实验中证明了将SaRNA导入人去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞,Numb基因高表达后,通过Hedgehog信号通路将人前列腺癌PC-3细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。本实验进一步通过将Numb高表达的PC-3细胞于裸鼠体表成瘤,并应用HE染色、RT-qPCR技术、Western Blot技术及流式细胞技术,验证Numb高表达后对前列腺恶性肿瘤生长的影响,以及其通过Hedgehog信号通路对人前列腺癌PC-3细胞的细胞周期的影响。方法1.将30只裸鼠随机分成三组,收集生长对数期的三组PC-3细胞扩增培养,并分别对三组裸鼠进行皮下注射Numb基因高表达的重组人PC-3细胞(重组PC-3细胞)作为实验组、空转染病毒的PC-3细胞作为对照组和未转染的PC-3细胞作为空白组,进行皮下成瘤实验。2.14d后取三组肿瘤组织分别进行HE染色。3.采用Real-time quantitative PCR(RT-qPCR)法检测三组肿瘤组织中Numb、SHH、GLi及CyclinE的mRNA表达水平。4.Western Blot法检测检测裸鼠成瘤组织中Nmub、SHH、GLi和CyclinE的蛋白表达水平。5.流式细胞仪检测三组裸鼠成瘤组织中的细胞周期情况。6.对比三组肿瘤组织的HE染色、RT-qPCR、Western blot及流式细胞术结果,探讨上调人PC-3细胞Numb基因后,Hedgehog信号通路启动子SHH、信号通路调节因子GLi和细胞周期转录因子CyclinE的mRNA及蛋白表达的影响情况。结果1.裸鼠皮下接种PC-3细胞2d后接种部位可见到一个白色的小皮丘,并逐渐缩小,14d后所有接种PC-3细胞的裸鼠均成瘤成功。实验组皮下瘤生长速度明显低于对照组及空白组,瘤体相对于对照组及空白组较小。该成瘤实验说明,Numb基因抑制了CRPC细胞在体内的增殖,对成瘤有抑制作用。2.HE染色结果显示,实验组细胞的增殖速度低于对照组及空白组。3.RT-qPCR结果显示实验组肿瘤组织Numb基因表达水平显著高于对照组和空白组裸鼠成瘤组织(p<0.05),对照组和空白组无显著差别(p>0.05);而SHh、Gli-1和CyclinE基因表达水平显著低于对照组和空白组裸鼠成瘤组织,差异有统计学意义(p<0.05)。4.Western Blot结果显示实验组肿瘤组织Numb蛋白表达水平显著高于对照组和空白组瘤组织,而SHh、Gli-1和CyclinE蛋白表达水平显著低于对照组和空白组瘤组织,差异有统计学意义(p<0.05);对照组和空白组相比,无统计学意义。(p>0.05)。5.流式细胞仪检测结果显示:裸鼠移植瘤肿瘤组织中,与阳性对照组和阴性对照组相比,实验组成瘤组织中的细胞被阻遏在G0/G1期,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例减少,差异有统计学意义(p<0.05),G2/M期细胞比例无明显差异;对照组和空白组比较,差异没有统计学意义(p>0.05)。结论将Numb-SaRNA转染入人前列腺癌PC-3细胞后,可抑制肿瘤的生长速度,Hedgehog信号通路重要因子SHH、GLi及CyclinE表达降低,且人前列腺癌PC-3细胞的细胞周期在G0/G1期被阻断,证实了SaRNA上调CRPC细胞Numb基因通过Hedgehog信号通路可将人前列腺癌PC-3细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期该结论在细胞层面及动物层面结果一致。