论文部分内容阅读
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,发病特征为腹泻、呕吐、脱水,新生仔猪的死亡率高达100%,各种年龄猪和不同品系的猪群均易感。该病于1971年在欧洲首次被报道后,不久相继在亚洲及南美相继暴发,给全球养猪业造成严重的经济损失。自2010年10月开始,PED在中国东南部10余个养猪大省暴发并迅速波及到全国,呈现出高发病率、高死亡率的态势,死亡仔猪超过100万头,给中国养猪业造成了沉重的打击。近几年PED的流行范围仍在不停的扩大,成为严重危害中国养猪业的传染病之一,直至目前仍没有削减的趋势。为进一步了解猪流行性腹泻病毒的流行特点及遗传变异情况,加强对猪流行性腹泻的防控,本研究对疑似PED的仔猪小肠和粪便样品进行了PEDV的分离与鉴定,并对分离到的毒株的S基因进行了序列测定与遗传变异分析,其主要结果如下:1.PEDV SX-YL株的分离与鉴定:将经RT-PCR鉴定为PEDV阳性的病料样品处理后,接种于Vero细胞,盲传至8代时,部分细胞开始出现皱缩、变圆、颗粒物质增多、折光性增强等CPE,对其进行TCID50测定,TCID50为10-6.125/mL。为证明该病变是由PEDV所引起,采用RT-PCR对细胞培养物进行了PEDV N基因的扩增,结果均为阳性。进一步进行了间接免疫荧光检测(IFA),结果表明,用PEDV阳性小鼠血清在PEDV感染24h后的Vero细胞中检测到了病毒抗原的存在,可见到红色荧光,而未被PEDV感染的Vero细胞,观察不到荧光。最终确定该病毒为PEDV,将其命名为PEDV SX-YL株。2.PEDV SX-YL株S基因的遗传变异分析:对前面分离到的PEDV SX-YL株的S基因进行测序,结果表明,该毒株S基因全长为4149bp,编码1382个氨基酸,与欧洲经典毒株CV777、韩国分离株DR13、欧洲近年流行株以及中国近年流行株的S基因进行比对,该毒株与经典毒株CV777、DR13、SC1402毒株同源性高达99%以上,处于同一分支,表明其与经典毒株的亲缘关系较近。综上所述,该研究从疑似PED的仔猪病料成功分离出一株PEDV毒株,与经典毒株有较近的亲缘关系,为陕西规模化猪场PED科学合理的免疫程序制定与有效防控提供了参考信息。