论文部分内容阅读
目的:
周围神经损伤后,靶源性神经营养因子(NTFS)无法通过逆向运输到达神经元,神经元会因缺少或丧失这些物质的支持而发生凋亡,特别是出现在运动神经元。以往的研究着重于选择有效的移植物,改善损伤微环境,以及靶组织分泌的神经因子对神经再生的趋化性和营养性等,而缺少移植物对相应神经元保护作用机制的研究。脱细胞神经移植物作为有生物活性的神经替代物,具有良好的仿生性和组织相容性,移植后为轴突再生提供适宜的微环境,能够有效促进神经再生。Bcl-2基因家族是迄今为止研究得最为深入和广泛的凋亡调控基因之一。其中Bcl-2和Bax分别是主要的抗凋亡和促凋亡成员,它们通过调节线粒体的功能来调节凋亡。本实验建立脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损模型,通过免疫组织化学染色和Western Blot检测凋亡指标Bcl-2、Bax在相应脊髓节段的表达,在基因和蛋白水平研究脱细胞神经移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用。
材料和方法:
1、化学萃取脱细胞方法制备脱细胞神经移植物
选用Wistar大鼠10只,经过麻醉后取出双侧坐骨神经,采用化学萃取方法制备脱细胞神经移植物。制备的脱细胞大鼠坐骨神经置入含100μg/ml庆大霉素和100μg/ml链霉素的PBS(PH7.4)液中,4℃下保存备用。
2、实验动物和分组
成年健康Wistar大鼠30只,体重200~250g,由中国医科大学实验动物部提供。随机分为三组,每组10只,正常组,实验组(脱细胞神经移植物桥接坐骨神经缺损组),对照组(坐骨神经缺损组)。
3、取材和检测
动物饲养1个月后,取各组相应节段脊髓(L4-L6节段),进行免疫组织化学染色和Western Blot检测Bcl-2、Bax在脊髓前角运动神经元内的表达。
实验结果:
1、术后大鼠手术侧后肢无法运动,拖地行走,并且出现足部皮肤红肿或不同程度的溃疡。术后1个月,各组大鼠手术侧足部皮肤红肿及溃疡基本消退,实验组大鼠术侧后蹬有力,足趾稍能分开,步态趋于正常,对照组大鼠运动功能未见恢复。
2、Bcl-2、Bax的免疫组织化学染色结果显示:Bcl-2、Bax阳性表达均定位于细胞质内,呈棕黄色。正常组偶见Bcl-2、Bax阳性细胞,实验组的Bcl-2阳性细胞略多于对照组,而实验组的Bax阳性细胞却少于对照组。
3、Western Blot结果显示:对照组Bcl-2较正常组表达减少,而实验组Bcl-2表达明显增多;正常组Bax几乎不表达,对照组表达明显增多,而实验组Bax表达减少。通过取Bcl-2/Bax的比值后结果显示,对照组较正常组明显下降(P<0.05),实验组较对照组明显升高(P<0.05)。
结论:
1、大鼠坐骨神经缺损后相应脊髓节段(L4-L6)内存在神经细胞的凋亡,Bcl-2和Bax的阳性表达是神经凋亡的重要指标
2、应用脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损,可以通过影响Bcl-2、Bax基因的表达,增加Bcl-2/Bax的比率抑制脊髓前角运动神经元凋亡,从而对脊髓运动神经元起到保护作用。